蛋白质纯化实验技术服务

蛋白质纯化简介:

蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。

蛋白质纯化的实验方法:

蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般蛋白纯化采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大.成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速、颗粒大、粒径分布宽.并可以迅速将蛋白与污染物分开，必要时可加入相应的保护剂(例如蛋白酶抑制剂)。防止目的蛋白被降解。精细纯化阶段则需要更高的分辨率，此阶段是要把目的蛋白与那些分子量大小及理化性质接近的蛋白区分开来，要用更小的树脂颗粒以提高分辨率，常用离子交换柱和疏水柱，应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性指树脂与目的蛋白结

合的特异性，柱效则是指各蛋白成分逐个从树脂上集中洗脱的能力，洗脱峰越窄，柱效越好。仅有好的选择性，洗脱峰太宽，蛋白照样不能有效分离。

蛋白的表达:

是指通过模式生物来表达目的的外源基因蛋白的一种现代分子生物学技术，表达系统主要是由宿主、外源基因、载体和辅助

成分组成，从而实现外源基因通过载体在宿主中的表达。

实验意义:

1.蛋白表达技术在基因工程技术中占有核心地位，在实际生产中具有重要的应用意义。

2.蛋白表达技术已经广泛应用于生物学各个具体领域,特别是体内的功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用。

实验原理:

1.获得目的基因;

2.构建合适的载体(注意根据目的基因和纯化方式的选择等多方面因素选择融合标签) ;

3.将目的基因插入表达载体中。并通过测序进行验证；

4.载体转化进入大肠杆菌等宿主菌后，测序筛选挑单克隆菌落进行扩大培养，IPTG诱导靶蛋白的表达；

5.破碎菌体后提取蛋白。并通过融合标签纯化得到靶蛋白。

分类:

1.真核表达系统:真核表达系统主要有昆虫表达系统、酵母表达系统和哺乳动物细胞表达，其中酵母表达和哺乳动物细胞较为常见。

2.无细胞体外表达系统，又称为体外翻译系统，通过模拟细胞的生命活动和现象来重现胞内蛋白的转录和翻译过程。

结果展示:

原核表达系统

真核表达系统

无细胞体外表达系统

Reaction temperature (C)

实验周期及交付标准:

1.实验周期: 4-6周

2.交付标准:目的蛋白、实验报告(试剂、 耗材、实验步骤)、原始数据等。

需确认的信息:

1.表达系统采取方式。

2.纯化步骤选择。