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分子实验-PCR

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伊莱博生物科技(上海)有限公司

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免疫学;ELISA试剂盒,抗体,生化试剂,相关试剂。原代细胞,传代细胞,及培养试剂

伊莱博生物科技(上海)有限公司,公司总部位于上海长江软件园。2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心,主要以生命科学研究为基础,专注于研究成果转化及技术服务创新,建立了包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学以及动物实验等学科的研究服务体系,为医学领域的发展做出了重要贡献。


目前已建成并投入使用的实验室面积近2800平方米,包含基础实验平台、组学实验平台以及动物实验平台,基本能够满足科研课题研究的全流程。


伊莱博生物拥有专业的技术支持和实验操作人员团队,核心成员来自中科院、复旦、交大、同济等国内重点高校及科研机构,能够提供前沿的、完善的实验技术咨询与服务。


为了响应国家大力发展基础研究的号召,推动实验科学领域的进步,伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势,为广大科研工作者提供实验技术培训服务,从理论和实操两个部分,培养其科研思维以及解决问题的能力,为今后的科研工作奠定坚实的基础。








详细信息

分子实验-PCR


分子实验-PCR实验的原理是DNA分子在电场中会向正极方向移动。不同长度的DNA由于受到凝胶介质的阻力不同,表现为不同的迁移率而被分开。


  1.试剂
  PCR产物,TAE电泳缓冲液,1000x溴化乙锭储存液,电泳级琼脂糖,DNA分子量标准
  2.实验准备
  配制TAE电泳缓冲液(50x储存液,pH约8.5: Tris 碱242g 57.1ml冰已酸,37.2g Na2EDTA.2H2O,dd water定容至lL),6x加样缓冲液(0.25%溴酚蓝,40%蔗糖水溶液) ; 1.5ml 离心管装入铝制饭|盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌)。
  3.操作步骤
  (1)称取0.4g琼脂糖粉,放入三角瓶,加入50ml TAE电泳缓冲液(1x),放入微波炉中烧开( lmin)。注意观察烧瓶中的琼脂糖粉末,待*熔化后停止微波炉(切不可让胶溶液溢出到微波炉中! )。
  (2)戴上线手套,从微波炉中取出三角瓶,置桌面上冷却致不烫手(约50-60°C)。
  (3)把梳子插到凝胶灌制模具的正确位置后缓缓倒入胶溶液。胶溶液倒至与模具的矮边缘相平即可,不要把胶溶液溢到外面。在桌面上静置10-20分钟待胶*凝固。(剩 下的胶溶液封口后留待以后再熔化使用)。
  (4)在水平电泳槽中加满1xTAE电泳缓冲液。根据电泳槽的长度把电泳仪的电压调至170V(10V/cm),注意正负电极的位置连接正确。
  (5)待胶*凝固后( 15-20分钟),小心拔出梳子。用手指捏住模具两侧的高边缘取出模具和凝胶放入电泳槽中间的平台上,凝胶要没入电泳液中。凝胶上有样品孔的侧要朝向电泳槽的负极。
  (6)在凝胶上选择相邻的加样孔。用10μl 的吸液头分别将管中的样品加入凝胶的加样孔中(如果需要时,在相邻的加样孔中加入1.5-3ul DNA分子量标准物)。
  加样时持移液器的手以肘部固定在桌上,用另一只手扶住这只手的手腕,以减少移液器的抖动。看到蓝色的样品吸管尖头伸进加样孔后(不能伸得太深,以免穿破凝胶的底部)缓缓将蓝色的样品压入加样孔中。切不可使蓝色样品流到孔外。
  (7)打开电源开关,样品将形成条蓝色的横带 向前移动 (如果发现蓝色向后移动,立即关闭电源,调换电极)。电泳将进行约30min。
  (8)当蓝色的溴酚蓝迁移到距凝胶边缘1cm时,关闭电源。取出模具和凝胶。放入凝胶成像系统中拍照。



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