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分子克隆与质粒载体构建
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伊莱博生物科技（上海）有限公司，公司总部位于上海长江软件园。2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心，主要以生命科学研究为基础，专注于研究成果转化及技术服务创新，建立了包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学以及动物实验等学科的研究服务体系，为医学领域的发展做出了重要贡献。
目前已建成并投入使用的实验室面积近2800平方米，包含基础实验平台、组学实验平台以及动物实验平台，基本能够满足科研课题研究的全流程。
伊莱博生物拥有专业的技术支持和实验操作人员团队，核心成员来自中科院、复旦、交大、同济等国内重点高校及科研机构，能够提供前沿的、完善的实验技术咨询与服务。
为了响应国家大力发展基础研究的号召，推动实验科学领域的进步，伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势，为广大科研工作者提供实验技术培训服务，从理论和实操两个部分，培养其科研思维以及解决问题的能力，为今后的科研工作奠定坚实的基础。
详细信息
一、实验原理
外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有—种大肠杆菌连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接效率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。
T4噬菌体DNA连接酶催化DNA连接反应分为3步：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶—AMP复合物；然后，酶—AMP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；后产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。
DNA重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法，为了防止载体本身的自连，可以通过(牛小肠碱性磷酸酶)CIP处理克服。
连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性.但是在这个温度下，粘性末端的氢键结合是不稳定的。因此人们找到了一个折中温度，即12-16℃，连接12-16h(过夜)，这样既可大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。
二、实验流程
目的DNA的扩增和纯化；
连接反应；
电泳检测连接产物。
三、客户提供
样本DNA，基因序列，试剂盒。
四、公司提供
构建好的载体，电泳胶图，测序结果。
实验周期：大约1-2月。
