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Nav1.7-GFP HEK293细胞系
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武汉艾美捷科技有限公司（AmyJet Scientific Inc），简称艾美捷科技（AmyJet Scientific）。2010年底成立于九省通衢的湖北省武汉市，历经五年多的发展，已成为国内的集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技生物企业。艾美捷科技总部设在武汉市洪山区光谷大道35号光谷总部二期时代1号楼13层，业务覆盖全国。
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艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系，目前已成为众多的中国总代理或一级代理，主要包括：Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、ABGENT、 Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、Abbkine、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、VIVA Bioscience 、Caisson Labs等，可以在*时间为用户提供Z前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。
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详细信息
稳定重组HEK293细胞系，工程化设计用于多X环素诱导表达人类Nav1.7（Genbank #Q15858），在C末端融合绿色荧光蛋白[激发约395 nm，475 nm；发射约510 nm]，并带有C末端链球菌素结合肽（SBP）融合。Nav1.7是一种河T毒素敏感的电压门控钠通道IX亚型α亚基（SCN9A）。
Nav1.7是一种电压门控钠离子通道，由人类SCN9A基因编码。它通常在两种类型的神经元中高水平表达：背根神经节和三叉神经节的伤害感受神经元，以及交感神经节神经元，这些是自主（不自主）神经系统的一部分。
Nav1.7存在于痛觉感觉神经末梢，即伤害感受器附近，接近冲动发起区域。Nav1.7通道产生快速激活和失活的电流，对河T毒素水平敏感。缺乏伤害感受器中Nav1.7的敲除小鼠显示出对炎症性疼痛反应减少[1]。
作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品Nav1.7-GFP HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。
| 产品名称 | 货号 | 详情 |
Nav1.7-GFP HEK293 细胞系 | BPS-60507 | 查看 |
应用
? 药物化合物筛选
? 功能测定
细胞培养协议
细胞解冻
1. 在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到含有10 ml预热的解冻培养基4（无Blasticidin或Zeocin）的试管中。在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。
2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在5 ml预热的解冻培养基4（无Blasticidin或Zeocin）中重悬。
3. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。
4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基4（无Blasticidin或Zeocin），并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好传代。
5. 细胞应在w全融合前传代。在s次传代及后续传代中，使用生长培养基4A（含Blasticidin和Zeocin）。
细胞传代
1. 抽去培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% Y酶/EDTA从培养容器中分离细胞。
2. 一旦细胞分离，加入生长培养基4A并转移到试管中。以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在不含Blasticidin和Zeocin的生长培养基4A中重悬。按照每周1:10至1:15的期望亚培养比例，将细胞种入新的培养容器中。
细胞冷冻
1. 抽去培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% Y酶/EDTA从培养容器中分离细胞。
2. 一旦细胞分离，加入生长培养基4A并计数细胞。
3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796，或10% DMSO + 90% FBS）中重悬，细胞浓度约为2 x 10^6个细胞/ml。
4. 将1 ml的细胞悬浮液分装到冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下保存过夜。
5. 次日将小瓶转移到液氮中保存。
注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。
目标蛋白表达的诱导
为了表达Nav1.7，细胞在收获或测定前24小时用DMEM/F12 50/50补充10% FBS、1%青M素/链M素、1 ?g/ml多X环素（Biochemika #44577）和3 mM丁酸钠（Acros Organics #263190250）诱导。
图1. 表达Nav1.7的细胞的Western Blot。
使用抗钠通道Nav1.7，克隆N68/6（Millipore #MABN41）染色的HEK293 Nav1.7细胞的Western Blot，随后使用碱性磷酸酶偶联的抗小鼠IgG（Rockland Immunochemicals #610-1502）。M：分子量标记。
文献参考：
1. Catterall, W.A. Cell and Developmental Biology 16: 521–555 (2000).
2. Choi, J.S., et al. Neurology 67:1563-1567 (2006).
3. Li, Y., el al. Protein Science 20 (1): 140–149 (2011).
BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。
作为BPS Bioscience在中国的区域代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BPS Bioscience以及客户订制化服务。
Nav1.7-GFP HEK293细胞系Nav1.7-GFP HEK293细胞系
