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NFAT报告基因-HEK293细胞系
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武汉艾美捷科技有限公司（AmyJet Scientific Inc），简称艾美捷科技（AmyJet Scientific）。2010年底成立于九省通衢的湖北省武汉市，历经五年多的发展，已成为国内的集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技生物企业。艾美捷科技总部设在武汉市洪山区光谷大道35号光谷总部二期时代1号楼13层，业务覆盖全国。
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艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系，目前已成为众多的中国总代理或一级代理，主要包括：Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、ABGENT、 Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、Abbkine、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、VIVA Bioscience 、Caisson Labs等，可以在*时间为用户提供Z前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。
随着公司业务的壮大，为了更好的服务客户，公司组建了一支在生物领域经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心，宣布进入自主研发阶段，以期将更多更优质的产品*给国内生物领域的同仁。相信在不久的将来，将陆续有印有艾美捷Logo的产品与大家见面，并逐渐受到大家的认可！
专业的技术力量使我们能够为广大用户提供强大的技术支持，深厚的人脉资源使我们在全国主要城市拥有众多合作伙伴，艾美捷科技非常荣幸能将世界上*的生物产品*给国内从事生物学领域科研的老师和同仁，配备的优秀销售队伍以及专业的技术支持，随时为客户提供技术咨询和售后服务。
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详细信息
蛋白激酶C (PKC)/钙离子(Ca2+)响应途径会导致激活T细胞激活因子的核因子（NFAT）。NFAT由Ca2+和钙离子/钙调蛋白依赖的丝A酸磷酸酶钙调磷酸酶调控。在静息细胞中，NFAT蛋白被磷酸化并位于细胞质中；受到刺激后，它们会被钙调磷酸酶去磷酸化，转移到细胞核，并诱导基因表达。
NFAT报告基因-HEK293细胞系包含一个在NFAT响应元件控制下的萤火虫荧光素酶基因，该基因被稳定整合到HEK293细胞中。这个细胞系已经验证了对佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA）和伊诺莫辛的刺激反应。
作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品NFAT 报告基因 - HEK293 细胞系 (PKC/Ca2+ 通路)。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。
| 产品名称 | 货号 | 详情 |
NFAT 报告基因 - HEK293 细胞系 (PKC/Ca2+ 通路) | BPS-79298 | 查看 |
应用
? 监测细胞内钙离子水平。
? 筛选PKC/Ca2+途径的激活剂或抑制剂。
所需但未提供的材料
? PMA（LC Laboratories, #P1680）在DMSO中制备库存溶液。
? 伊诺莫辛（Sigma, #I3909）在DMSO中制备库存溶液。
? 检测培养基：解冻培养基1（无遗传霉素）
? 生长培养基1B（BPS Cat. #79531）
? 96孔组织培养板或96孔组织培养处理的白色透明底部检测板
? RO-31-8220（EMD Millipore, #557520）或其他PKC抑制剂
? 用于测量萤火虫荧光素酶活性的ONE-Step荧光素酶检测试剂（BPS Bioscience, #60690）。
? 荧光素酶检测仪
A. NFAT报告基因-HEK293细胞对TCR交联剂的反应。
1. 在生长培养基1B中收获NFAT报告基因-HEK293细胞，并将细胞以每孔约30,000个细胞的密度播种到含有45 ?l检测培养基的白色透明底部96孔微孔板中。
2. 将板在37°C的CO2培养箱中培养过夜（约18-24小时）。
3. 将TCR交联剂（PMA与伊诺莫辛）稀释到检测培养基中，达到所需最终浓度的10倍，并每孔加入5 ?l稀释液。（我们建议从30 nM PMA和1 ?M伊诺莫辛的起始浓度开始。）最终DMSO浓度可高达0.5%。
向未刺激对照孔中加入相同浓度DMSO但不含交联剂的5 ?l检测培养基。
向无细胞对照孔中加入含DMSO的50 ?l检测培养基（用于确定背景发光）。
每个处理至少设置三次重复。
4. 将细胞在37°C的CO2培养箱中培养过夜（约18小时）。
5. 第二天，使用ONE-Step荧光素酶检测系统进行荧光素酶检测：
每孔加入50 ?l ONE-Step荧光素酶试剂，并在室温下摇动约15分钟。使用荧光素酶检测仪测量发光。
6. 数据分析：从所有孔的发光读数中减去平均背景发光（无细胞对照孔）。
NFAT荧光素酶报告基因表达的诱导倍数 = 刺激孔的背景减去发光/未刺激对照孔的平均背景减去发光。
图1. NFAT报告基因（荧光素酶）-HEK293细胞对TCR交联剂伊诺莫辛与PMA的反应。
B. NFAT报告基因-HEK293细胞对TCR交联剂抑制剂的反应。
1. 在生长培养基1B中收获NFAT报告基因-HEK293细胞，并将细胞以每孔约30,000个细胞的密度播种到含有45 ?l检测培养基的白色透明底部96孔微孔板中。
2. 将板在37°C的CO2培养箱中培养过夜（约18-24小时）。
3. 将抑制剂（RO-31-8220）稀释到检测培养基中，达到所需最终浓度的10倍，并每孔加入5 ?l稀释液。最终DMSO浓度可高达0.5%。
向未抑制对照孔中加入相同浓度DMSO但不含抑制剂的5 ?l检测培养基。
4. 将TCR交联剂（PMA与伊诺莫辛）稀释到检测培养基中，达到所需最终浓度的10倍（我们建议从30 nM PMA和1 ?M伊诺莫辛的起始浓度开始）并每孔加入5 ?l稀释液。最终DMSO浓度可高达0.5%。
向未刺激对照孔中加入相同浓度DMSO但不含交联剂的5 ?l检测培养基。
向无细胞对照孔中加入含DMSO的55 ?l检测培养基（用于确定背景发光）。
每个处理至少设置三次重复。
5. 将细胞在37°C的CO2培养箱中培养过夜（约18小时）。
第二天，使用ONE-Step荧光素酶检测系统进行荧光素酶检测：
每孔加入55 ?l One-Step荧光素酶试剂，并在室温下摇动约15分钟。使用荧光素酶检测仪测量发光。
6. 数据分析：从所有孔的发光读数中减去平均背景发光（无细胞对照孔）。
通过将每种条件除以刺激孔的背景减去发光来计算NFAT荧光素酶报告基因表达的百分比。在没有RO-31-8220的情况下，用1 ?M伊诺莫辛和30 nM PMA刺激的细胞的背景减去发光被设为100%。
图2. RO-31-8220抑制PKC在PMA和伊诺莫辛诱导的NFAT报告基因（荧光素酶）-HEK293细胞中的作用。
结果以发光百分比显示。在没有RO31-8220的情况下，用1 ?M伊诺莫辛和30 nM PMA刺激的细胞的背景减去发光被设为100%。
BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。
作为BPS Bioscience在中国的区域代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的BPS Bioscience以及客户订制化服务。
NFAT报告基因-HEK293细胞系NFAT报告基因-HEK293细胞系
