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多肽脱盐离心柱
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色谱柱类:美国热电ThermoFisher,、安捷伦(Agilent)、美国WATERS、瑞典Kromasil 、日本Cosmosil 、大赛璐(Daicel)、日本YMC 、日本TOSOH,日本三菱化学(MITSUBISHI CHEMICAL)、等。
标准品类:美国药典USP,欧洲药典EP, 英国LGC, 日本药典JP, 加拿大TRC,中检所
分离纯化填料:GE公司、富士填料(FUJI)、大曹填料(DAISO GEL),YMC公司填料,加拿大silicycle, 三菱化学树脂(MITSUBISHI CHEMICAL),罗门哈斯树脂(Amberlite)、国产树脂。
小型仪器:柱温箱、萃取仪、旋转蒸发仪、移液器。
德国徕卡Leica一次性刀片、冷冻包埋剂、切片石蜡、钢刀、盖玻片、防卷板、包埋模具、封片胶等病理耗材试剂
使用流程
样品制备:添加TFA到胰蛋白。酶解样品中,使样品中含TFA的最终浓度为0.1%。
活化:加入200 μL乙腈或甲醇至离心柱中,2500◊g离心1min,弃去流出液
平衡:加入200 μL 0.1%TFA至离心柱中,2500◊g离心1min,弃去流出液
上样:将200 μL含有0.1%TFA的样品溶液上样至离心柱,2500◊g离心1min,弃去流出液
淋洗:加入200 μL含0.1%TFA水溶液至离心柱中,2500◊g离心2min
洗脱:分三次加入共200 μL 70%乙腈溶液进行洗脱,2500◊g离心2min,收集滤液,在室温下氮气 吹至近干。
复溶:加入200 μL0.1%甲酸水或者合适溶液进行复溶,用于质谱分析。
注意事项 相关产品
1.每根离心柱最多可吸附30 μg肽;
2.根据质谱的灵敏度选择合适的上样体积及复溶体积;
3.上样样品溶液不能含有高浓度甲醇或者乙腈,若含有可采用氮吹置换溶剂;
4.塑料管容易对肽产生非特异性吸附,需避免过多使用;
5.上样过程中需保持脱盐柱中柱床湿润;
6.如果样品含有高浓度的盐(如2M尿素或者>100 mM碳酸氢铵)重复淋洗步骤一到两次。
7.使用产品前,需竖直放置离心管用手指轻弹管身,让填料聚集在柱管底部,再打开瓶盖添加溶剂