通用名称：柯萨奇病毒16型病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）
英文名称：Diagnostic Kit for Coxsachie Virus 16（CA16）viral RNA（Fluorescence PCR）
产品特点:
本试剂用于对咽试子、肛试子样本中CA16病毒RNA进行定性检测，用于CA16病毒感染的辅助诊断及流行病学监控。
【检验原理】根据荧光PCR技术原理，针对CA16病毒基因设计特异性引物和Taqman探针，通过荧光PCR检测仪进行检测，从而实现对CA16病毒RNA的定性检测。
该系列的荧光PCR法检测试剂盒内包含满足48人份检测所需要的试剂，同常规RT-PCR检测方法相比，该检测试剂盒具有以下的优点：
1、无需电泳分析PCR终末产物；
2、在PCR扩增过程中实时检测核酸的扩增；
3、具有快速、简便、敏感和特异的优点；
4、可以防止因打开PCR产物污染样品的风险。
试验方法：
【检验方法】
1. 核酸分离：
取200μl咽试子（肛拭子）样本进行核酸提取。采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 （硅胶膜吸附法），该试剂盒可用于对肠道病毒样本中的病毒RNA提取，并按试剂盒说明书要求操作。
本品中的阴性对照和阳性对照均参与核酸提取。
2. PCR扩增：
2.1 实验设计：
2.1.1待检样本检测：每份样本使用CA16反应液进行检测，根据CA16反应液的检测结果对样本进行判定。
2.1.2对照品检测：每次试验都应设置阴性对照和阳性对照。
2.2反应体系的配制：
2.2.1准备工作：将CA16反应液融化后振荡混匀，离心6000rpm 10秒。
2.2.2 反应体系配制：取1个1.5ml 无核酸酶离心管，计算待测样本数量（n），取20μl×（n+2）CA16反应液、1μl×（n+2）DNA聚合酶和0.35μl×（n+2）逆转录酶充分混匀，离心6000rpm 10秒。
n+2=n份样本+1份阳性对照+1份阴性对照;
2.3反应体系分管：
每份待测样本设置1个PCR扩增管，分别将每种反应体系按20μl/管分装至对应的PCR扩增管中。
2.4加样：
取5μl（待测样本RNA、阴性对照、阳性对照）分别加入1个PCR扩增管。
2.5扩增检测：
将加样后的PCR扩增管分别转移到全自动荧光定量PCR检测仪上进行扩增检测，不同仪器的设置如下：
2.5.1全自动荧光定量PCR检测仪（RG3000、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型）扩增程序：
对于ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光定量PCR检测仪，荧光信号设置为：Reporter Dye1：FAM，Quencher Dye1：NONE，Passive Reference：NONE。其他型号仪器可设置为FAM通道（仅收集FAM荧光信号）。荧光PCR扩增程序的设置见表1。反应总体积为25μl。
其他详见说明书...
结果的解释、产品性能指标:
3. 结果分析：
3.1本品荧光探针的报告荧光为FAM，应选择F1（Fam）通道分析试验结果。
3.2 基线（Baseline）范围根据仪器要求设定，目的为校正背景荧光干扰，终止循环（END）一般设置为强样本出现扩增信号的前3-4个循环。
3.3 阈值线用于判断样本是否扩增，应调整使阈值线高于荧光背景和阴性对照的荧光信号，或点击分析（Analysis）自动获得。
4. 质量控制：
每次试验应设置阳性对照和阴性对照，且应符合以下要求，否则试验结果不成立。
4.1阴性对照无Ct值或Ct值为0。
4.2 阳性对照Ct值小于30.0。
【参考值（参考范围）】
Ct值≤37.0报告该反应阳性；无Ct值或Ct值为0报告该反应阴性；
37.0＜Ct值＜40.0为灰区。
【检验结果的解释】
结果在灰区的样本需重复试验：取400μl样本重新提取RNA（核酸分离试剂盒中裂解液、助沉剂、无水乙醇的用量加倍，其他组分的用量不变）并检测。复检结果Ct＜40.0的样本为阳性，否则为阴性。
【检验方法的局限性】
本试剂盒检测的靶序列为肠道病毒CA16型病毒基因，该靶基因在各毒株间都是高度保守且很稳定。但如果在靶序列处发生基因突变，则有可能造成假阴性结果，即发生漏检。
规格、有效期:
【包装规格】48人份/盒
【储存条件及有效期】-20℃冷冻保存，有效期暂定6个月，阳性对照反复冻融次数不得超过5次。
【适用仪器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光PCR检测仪。
【样本要求】1. 样本类型：咽试子、肛试子。
