生物制品内毒素去除策略——Etoxiclear™内毒素亲和层析

内毒素作为生物药安全检项，是法规要求的必检项，所有药物生产对于内毒素的控制都非常严格（＜5EU/kg体重），内毒素的去除成为生物药工艺控制的一个重要环节。内毒素去除目前面临的困境是比较耗时，同时去除过程也会导致产品的损失以及毒性物质的引入。所以内毒素的去除一直困扰很多企业，特别是在大肠杆菌大规模生产阶段。

内毒素的去除方法主要有超速离心，离子交换和亲和层析的方法，在大规模生产工艺中内毒素的去除主要采用后两种方式，离子交换原理是结合带负电荷的内毒素，对于质粒DNA或者酸性蛋白质的内毒素去除效果会不够理想，所以目前工业界倾向于亲和层析的方法去除内毒素。亲和层析的好处在于能够特异性结合内毒素，终产品的损失少（相对于离子交换），应用范围较广，包括质粒DNA和蛋白质，同时，也不会有毒性物质的引入。

本文将推荐一款来自英国Astrea Bioseparations的Etoxiclear™层析介质，它是一种高性能、非离子交换、合成的亲和层析吸附剂，可经济高效地去除内毒素，支持GMP生产，有凝胶和一次性预装柱两种形式产品，满足不同的工艺需求。

什么是EtoxiClear™亲和层析？

亲和层析是一种特殊的蛋白质纯化方法，其利用生物分子之间的特异相互作用进行分离。EtoxiClear™亲和层析针对内毒素具有高选择性和高分辨率，可以更好的去除内毒素。亲和层析的优点在于其高度特异性和高纯度，适用于对纯度要求很高的生物制品的生产。虽然过离子柱可以在一定程度上控制内毒素水平，但是个别项目仍然会有超标的可能。EtoxiClear™是市场上非常特别的一款去除内毒素的产品，相比于离子层析方法，EtoxiClear™优势包括：

• 高特异性：专为去除内毒素而设计，可特异性去除内毒素

• 高载量：高内毒素动态结合载量（> 1,000,000 EU/ml）；

• 经济高效，支持放大；

• pH兼容范围广：pH 4.0 - pH 8.0，

• 满足GMP物料要求，法规注册资料完善

• 低蛋白结合率：通常目的蛋白回收率>90%；

• 高度稳定、人工合成、无毒的亲和配基；

• 有预装柱和填料两种产品形式，可满足不同需求。

• 填料耐碱性强：0.5M-1M NaOH CIP

EtoxiClear™内毒素亲和填料性能数据

可扩展性

EtoxiClear™已被证明能够在实验室规模(5mL柱)和工业规模(785mL)下有效去除纯化的免疫球蛋白溶液中的内毒素。

上样：含有相似起始内毒素浓度的IgG蛋白溶液(~5 mg/mL)

处理能力强

EtoxiClear™可提供填料和预装柱两种形式产品，以满足不同的实验需求。下表可用于估算处理不同规模样品所需的柱尺寸。

规格：EvolveD™柱，5 min保留时间

针对常用缓冲液的内毒素清除数据

EtoxiClear™可用于各种缓冲液的内毒素去除。下表显示了细胞培养应用中常用的各种缓冲液的内毒素清除效率，即使较低的起始内毒素浓度(~20EU/mL)也可以有较高的内毒素清除率。

* 等于或低于检测限值

高内毒素清除率

EtoxiClear™具有很高的内毒素清除率，可从多种蛋白样品中进行出色的蛋白质回收，如下表所示的人血清白蛋白（HSA）和免疫球蛋白（IgG）溶液(均为~9 mg/mL)。

HSA样品内毒素清除率99.7%

IgG样品内毒素清除率98.9%

低蛋白结合率

与离子交换吸附剂不同，EtoxiClear™显示出极低的蛋白质结合性，不受蛋白质等电点范围限制，蛋白质回收率高(通常高于90%)，如下所示：

EtoxiClear™技术参数

 生物制品内毒素去除策略——Etoxiclear™内毒素亲和层析

产品订购信息

Astrea Bioseparations于1987年孵化自剑桥大学，拥有超过30年层析介质研发和生产经验，是层析介质产品与服务供应商。目前使用Astrea的产品已有超过21个生产工艺通过了FDA和EMA的批准。Astrea Bioseparations在全球拥有3个研发和生产基地，专注为生物大分子和CGT领域提供行业的层析介质和技术服务。Astrea Bioseparations推出的基于纳米纤维的新型层析技术，解决了传统生物分离工具载量低和工艺耗时问题，实现更快、更环保、更具成本效益的纯化过程，符合当今生物治疗创新的需求。西美杰是Astrea Bioseparations中国区代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。