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人淋巴细胞来源于人外周血,可根据不同实验目的可选择密度梯度离心法、吸附分离法或其它特殊分离方法。Böyum在密度梯度离心法的基础上提出通过使用Ficoll®甲泛影钠溶液离心快速分离的方法,操作更方便、更快速。稀释的血液在Ficoll®甲泛影钠溶液中通过短时间的低速离心即可分层,红细胞和粒细胞沉降至管底、淋巴细胞和血小板在中间形成2个分层。
使用说明:
1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合
2. 无菌转移3 mlLSM到15 ml离心管中。
3. 混合2 ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液 和2 ml 生理盐水
4. 仔细的将稀释血液加入3 mlLSM(室温)于15ml离心管中,在血液和LSM中形成一个明显的分层。不要将稀释血液混合入LSM中。
5. 室温下400g离心15-30分钟,离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以在LSM上形成一层单核淋巴细胞,如上图所示。
6. 吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。
7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中,室温离心10分钟,离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻,例如160 – 260 x g(去除LSM和降低血小板的百分比)。
8. 用平衡盐缓冲液清洗细胞,用适当的培养基重悬细胞。
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850494 LSM-LYMPHOCYTE SEPARATION MEDIUM淋巴细胞分离液 100ml ¥335 ¥180
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