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肾上腺素检测试剂盒（定量）
产品详细
中文名称 | 肾上腺素ELISA试剂盒 |
英文名称 | Adrenalin ELISA (Epinephrine) |
产品货号 | RE59251 |
产品规格 | 96T |
检测样本 | 血浆和尿液 |
适应物种 | 人 |
预期用途 | 可用于人血浆和尿液中肾上腺素的体外定量检测 |
储存条件 | 2~8℃ |
产品品牌 | 德国IBL |
供应商家 | 深圳市科润达生物工程有限公司 |
ELISA试剂盒预期用途
肾上腺素ELISA试剂盒可用于人血浆和尿液中肾上腺素的体外定量检测。
ELISA试剂盒检测原理
肾上腺素ELISA试剂盒利用的夹心法原理。微孔中包被了羊抗兔抗体。之后加入的液态抗体可以结合到抗原分子的一个抗原决定簇上，而抗原分子可在温育期内结合到固相抗体上。样品中的抗原与酶标二抗一起在微孔内温育，此酶标二抗可结合到抗原分子上的另一不同表位上。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成正比。样品的结果可直接从标准曲线上读取。
贮存与稳定性
肾上腺素检测试剂盒（定量）和运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。
肾上腺素ELISA试剂盒成分
注意：试剂盒有足够做96份单孔检测或48份双孔检测所需的试剂成分
数量 | 标志 | 成分 |
1×12×8 | MTP | 包被板，可拆，微孔中包被了抗兔IgG（羊，多克隆抗体）。 |
1×6×2.5ml | CAL A-F | 标准品A-F，即用 肾上腺素:0;1.5;5;15;50;150ng/ml(0;8;27;82;273;819nmol/L) 去甲肾上素:0;5;15;50;150;500ng/mL(0;30;89;296;887;2955nmol/L) 多巴胺:0;60;180;585;2300;11470ng/mL (0;392;1175;3819;15014;74876nmol/L) 内含[-]肾上腺素，[-]去甲肾上腺素，[-]多巴胺(有生物活性),0.1M的HCl |
1×2×2.5ml | CONTROL 1+2 | 质控品1+2 即用,内含[-]肾上腺素，[-]去甲肾上腺素，[-]多巴胺(具有生物活性),0.1M的HCl,具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签. |
1×400μL | ENZCONJ CONC | 酶联物 浓缩型（50×） 内含：碱性磷酸酶标记的抗体，Tris缓冲液，HCl，0.01%的NaN3 |
2× | EXTRPLATE | 提取板（微孔板） 每板24孔，包被了硼酸亲和凝胶。 |
1×60ml | EXTRBUF | 提取缓冲液 粉红色，即用，内含：0.016%的NaN3。 |
2×1.25ml | C OMT LYO | C OMT冻干粉 内含：儿茶酚-氧位-甲基转移酶（猪肝），NaN3 |
1×2ml | C OMT ADD | C OMT添加剂 内含：人血浆，稳定剂，0.01%硫柳汞。 |
1×8ml | ANTISERUM AD | 肾上腺素抗血清 绿色，即用，内含：抗肾上腺素抗体（兔），缓冲液，稳定剂。 |
2×1.25ml | COENZ | 辅酶溶液 即用，内含：S-腺苷-L-蛋白酸，稳定剂。 |
1×3ml | ENZBUF | 酶缓冲液 即用，内含：Tris缓冲液，HCl，稳定剂。 |
1×13ml | RELEASEBUF | Release缓冲液 黄色，即用，内含：0.1M的HCl，指示剂。 |
1×3ml | ACYLREAG | 酰化试剂 即用，内含：二甲基甲酰胺，乙醇。注意：有毒，高可燃性。 |
1×100ml | WASHBUR CONC | 洗涤液 浓缩型（10×） 内含：Tris缓冲液，HCl，吐温，0.2%的NaN3 |
1×25ml | PNPP SUBS | PNPP底物片 内含：对硝基苯磷酸（PNPP） |
1×15ml | PNPP STOP | PNPP终止液 即用，内含：1M的NaOH，0.25M的EDTA |
3× | FOIL | 粘性金属板 |
肾上腺素ELISA试剂盒实验所需器材（但试剂盒不提供）
■移液器（10；10-100；100-1000μL）
■轨道摇床（200-900rpm）
■旋涡混合器
■带储器的8通道移液器
■洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统
■酶标仪
■双蒸水或去离子水
■吸水纸，取样吸头，计时器
■样本稀释试管
■0.1M HCL，用于尿液样本稀释
肾上腺素ELISA试剂盒检测步骤（手工版）
1.C OMT酶溶液的准备
注意！C OMT酶溶液现配现用 |
用1.25mL的蒸馏水溶解C OMT，混匀*；然后将1.25mL的辅酶液、1.25mL酶缓冲液和0.40mL的C OMT附加液混匀到C OMT酶溶液中，终定容到4.15mL/支。3支分别用于检测肾上腺素，去甲肾上腺素和多巴胺。溶液可能有些浑浊。充分混匀，避免起泡。C OMT溶液在室温下能保持稳定1小时 |
*如果C OMT溶液只需要使用一部分，剩下的C OMT溶液应该在-20℃下分装冻存。这些C OMT溶液在上述条件下能稳定保存1~2个月。
1.样本、标准品和质控品的酶衍生化（微孔板）
注意 | 如果要检测肾上腺素和去甲肾上腺素，我们建议您先检测肾上腺素。如果使用自动置换型洗液器加样，请将取样吸头内的残余液体加入到提取板的相应微孔内，否则剩余的提取液不够去甲肾上腺素检测用。将提取板放到有一定坡度的位置上。实验开始前，确定好肾上腺素和去甲肾上腺素的检测孔并标记好。 |
尿液与血浆中的去甲肾上腺素
1 | 在包被板的每一微孔中加入75μL刚配置好的C OMT酶溶液，轻轻振荡。 |
2 | 将100ul提取的标准品，质控品和样本加入至相应的孔内，在此步骤中，将枪头直接触碰C OMT酶溶液，颜色会转为粉红色，轻轻混匀 |
3 | 在每一微孔中加入50ul肾上腺素抗血清（绿色）。 |
4 | 盖板，在振荡器（400-600rpm）上室温（18-25℃）温育120min |
5 | 移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板4次。吸水纸上拍干以除去残余液体。 |
6 | 在每一微孔中加入100ul临时配置好的酶联物。 |
7 | 盖板，在振荡器（400-600rpm）上室温（18-25℃）温育60min |
8 | 移去粘性金属板，弃取孔内反应液，每孔用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板4次。吸水纸上拍干以除去残余液体。 |
9 | 如果可以的话，使用8道移液器加底物液和终止液。加底物液和终止液的时间间隔应当相同，使用自动置换型移液器并避免气泡产生。 |
10 | 在每一微孔中加入200ulPNPP底物液 |
11 | 在振荡器（400-600rpm）上室温（18-25℃）温育40min |
12 | 在每一微孔中加入50ul PNPP终止液，轻轻振板以使溶液混合均匀。 |
13 | 加终止液后60min内405nm处读取OD值。（参考波长：620-650nm） |
期望值
实验结果不能当作判断任何治疗结果的为一因素，疾病的判断还应当与其它临床观察和诊断检测相结合。以下结果为正常人群的正常值（5%-95%），建议每个实验室读确定自己的正常值范围：
尿液 | 血浆 | |||
μg/d | nmol/d | pg/mL | nmol/L | |
去甲肾上腺素 | ＜20 | ＜110 | ＜125 | ＜0.68 |
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