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高迁移率族蛋白b1试剂盒（科研） HMGB1试剂盒（ELISA法）
通用名称：人高迁移率族蛋白检测试剂盒（ELISA法）
英文名称：HMGB1 ELISA
产品规格：96T
产品货号：ST51011
产品品牌：德国IBL
试剂盒预期用途
高迁移率族蛋白b1试剂盒（定量）可用于定量测定人血清和血浆中的HMGB1含量。此外，该试剂盒可用于来自牛，猪，兔，小鼠和大鼠的血清，血浆和脑脊液（CSF）的研究。也可以检测细胞培养基和BALF（支气管肺泡液）。
前言简介
HMGB1是大约30kDa的蛋白质，是非组蛋白核蛋白组的主要成分。HMGB1（高迁移族Box1蛋白）是转录调节因子，通常存在于哺乳动物细胞的细胞核和细胞质中。
HMGB1在恶性疾病等疾病的发病机理中起重要作用。在肿瘤的情况下，细胞的氧供应可以断开。 这导致细胞死亡（坏死）和释放HMGB1，进而导致在相邻肿瘤环境中形成朝向肿瘤的血管生成。这些血管确保肿瘤的存活和进一步的生长。
体外研究表明，通过定量测定HMGB1浓度，可以区分病理性细胞死亡（坏死）和生理细胞死亡（细胞凋亡）。在坏死中观察到更高的HMGB1值。HMGB1在脓毒性休克后期也起重要作用。 结果表明，即使在脓毒性休克后期，HMGB1在动物实验中的抑制显着提高了啮齿动物的存活率。HMGB1通过与RAGE（“晚期糖基化终产物的受体”）结合起作用，具有与细胞因子TNF-α和IL-6相似的促炎作用。 脓毒症患者血清中也可见高值。血液中的HMGB1浓度在许多其他疾病中也增加，包括类风湿性关节炎（RA）急性肺损伤（ALI）和弥散性血管内凝血（DIC）。HMGB1 ELISA由Ikuro Maruyama博士和Shino-Test Corporation（日本）开发。本产品由Shino-Test公司授权的IBL制造。
试剂盒检测原理
高迁移率族蛋白b1试剂盒（定量）是用于定量测定血清和血浆中HMGB1的夹心酶免疫测定。 微量滴定板孔用纯化的抗HMGB1抗体包被。样品中的HMGB1特异性结合固相的抗体，并被第二个酶标记的抗体识别。底物反应后，HMGB1浓度由颜色强度决定。
试剂盒组成成分
| 数量 | 标签 | 组成 |
| 1 x 12 x 8 | MTP | 微孔板可拆卸，包被有抗HMGB1多克隆抗体 |
| 1 x | ENZCONJ LYO | 酶标记物 冻干粉含有与过氧化物酶结合的HMGB1，2 。 |
| 1 x | CAL LYO | 标准品 冻干粉含有猪HMGB1 ，稀释见章节10.1 |
| 1 x | CONTROL+ LYO | 阳性质控 冻干粉含有猪HMGB1 ，稀释见章节10.1 |
| 1 x 20 mL | DILBUF | 稀释液即用型，含有：缓冲液，0.01 % NaN3. |
| 1 x 12 mL | ENZCONJ DIL | 酶标记物稀释液即用型，含有：缓冲液 |
| 2 x 100 mL | WASHBUF CONC | 洗涤液 5X浓缩含有：磷酸盐缓冲液，<0.5 %Tween 20. |
| 1 x 6 mL | COLREA A | 底物液A即用型。 |
| 1 x 6 mL | COLREA B | 底物液B即用型 |
| 1 x 12 mL | COLOUR STOP | 终止液即用型，含有：0.35M硫酸 |
| 2 x | FOIL | 盖板膜 |
所需材料（未提供）
1. 微量移液器（Multipette Eppendorf或类似设备，CV<3％）。 体积：10; 20; 100; 100-1000μL
2. 涡街搅拌机
3. 轨道摇床（500 rpm）
4. 8通道微量移液器
5. 洗瓶，自动或半自动微量滴定板清洗系统
6. 能够读取450nm吸光度的酶标仪（参考波长600-650nm）
7. 双蒸水或去离子水
8. 纸巾，吸头和定时器
9. 聚苯乙烯（PS）或聚丙烯（PP）管用于标准和样品稀释
10. + 37°C和+ 25°C孵育箱
储存条件
高迁移率族蛋白b1试剂盒（科研）在环境温度下运输，储存应在2-8°C。 远离热源或阳光直射。 样品和制备的试剂的储存和稳定性在相应的章节中有描述。开封的微量滴定板条在试剂盒的有效期限内保持稳定，但应在密封的袋子中储存在2-8°C。
HMGB1试剂盒检测步骤
| 1 | 分别加入100ul稀释液到相应的板孔中。 |
| 2 | 分别加入10ul稀释液到板中的空白孔。 |
| 3 | 分别加入10ul标准品，阳性质控及血清或血浆样本到相应的孔中，短暂摇动30s。 |
| 4 | 用盖板膜盖板，在+37℃温育20-24h。 |
| 5 | 移去盖板膜，弃去溶液，用稀释好的洗涤液400ul/孔洗涤板孔5次，用吸水纸拍干多余的液体。 |
| 6 | 每孔加入100ul酶标记物。 |
| 7 | 盖板膜盖板，+25℃温育2 h。 |
| 8 | 移去盖板膜，弃去溶液，用稀释好的洗涤液400ul/孔洗涤板孔5次，用吸水纸拍干多余的液体。 |
| 9 | 为了添加显色液和终止液，如果有的话，可以使用8通道微量移液器。移液应在底物液和终止液加液时的相同时间间隔内进行。使用正位移并避免形成气泡 |
| 10 | 每孔 加入100ul显色液。 |
| 11 | 室温(18-25°C)孵育30min。 |
| 12 | 每孔加入100ul终止液终止反应，将内容物轻轻混合摇匀。 |
| 13 | 清理板孔背面。 小心不要划伤板孔，因为这可能会干扰测量。 |
| 14 | 60min内在450nm（参考波长600-650nm）处读取吸光度值。 |
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