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新喋呤定量检测试剂盒(酶联免疫法)
通用名称:新喋呤试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:Neopterin ELISA
产品规格:96T
产品货号:RE59321
产品品牌:德国IBL
新喋呤试剂盒预期用途
新喋呤定量检测试剂盒RE59321可用于体外诊断定量检测人血清、血浆和尿液中的新喋呤含量。仅用于科研使用。
前言简介
新喋呤生物合成与细胞免疫系统的活性关系密切,据报道在病毒感染病人新喋呤升高,认为升高源于直接防御病毒感染细胞的免疫应答。已证实抗原刺激人外周血单核细胞可引起新喋呤释放入细胞培养液中,人巨噬细胞在体外培养时受γ-干扰素刺激产生新喋呤。人体液中新喋呤水平的测定为细胞介导免疫的相关疾病监测提供了一种有用和创新的工具。许多传染病,新喋呤水平升高先于临床表现和血清变化。通常样本不会进行所有可能的传染病测定,因此为了降低输血传染的危险性,对献血员样本进行新喋呤测定是有意义的。
测定新喋呤的其它诊断应用有:
●重复损伤的ICU病人
●用于预测HIV感染和恶性疾病
●移植手术后病人并发症的早期预测
●自身免疫性疾病、疾病活动的指征
●病毒感染的诊断
●急性病毒和细菌感染的鉴别诊断
●慢性感染复发和免疫刺激治疗的监测
新喋呤试剂盒检测原理
本实验应用固相的竞争ELISA原理。样本中的抗原和酶标记的抗原竞争抗体的结合位点(兔抗新喋呤)。抗原-抗体复合物连结到包被了羊抗兔抗体的酶标板上。未连结的抗原经洗涤步骤除去。底物反应后形成的颜色强度与样本中抗原的量成反比例关系。样本的浓度可以直接在标准曲线中读出。
新喋呤试剂盒组成成分
名称 | 数量 | 成分 |
微孔板 | 12×8 | 微孔中包被了羊抗兔IgG(多克隆) |
抗血清 | 1×8ml | 即用型、含抗血清(兔)、磷酸盐缓冲液、稳定剂 |
酶联物 | 1×13ml | 即用型 |
标准品A~F | 6×1.5ml | 浓度:0、1.35、4.0、12.0、37.0、111nmol/L 即用型、含新喋呤、磷酸盐缓冲液、稳定剂 |
质控1+2 | 2×1.5ml | 即用型、浓度/可接受范围见质控单 |
分析缓冲液 | 1×21ml | 即用型、含磷酸盐缓冲液、BSA、稳定剂 |
洗涤液 | 1×50ml | 20倍浓缩、含吐温、稳定剂 |
底物液 | 1×19ml | 即用型,缓冲液、稳定剂 |
终止液 | 1×19ml | 即用型、含1M硫酸 |
所需材料(未提供)
1、移液器,体积10、50、100、1000ul
2、混合器
3、定轨振荡器(500rpm)
4、8通道移液器,带加样槽
5、洗涤瓶,自动或者半自动洗板机
6、450nm酶标仪(参考波长为600-650nm)
7、双蒸水或去离子水
8、吸水纸,吸头和计时器
储存条件
新喋呤试剂盒运输和储存的温度为2~8℃。避免直接的光照和加热。微孔板拆封后保存在密封袋中2~8℃,可以稳定至有效期。
样本稀释
血清、血浆
不需要稀释,避免阳光直接照射
尿液
使用分析缓冲液按1:101稀释
如10ul+1000ul,避免阳光直接照射
样本的浓度高于蕞高标准品的,必须进一步稀释。
新喋呤试剂盒检测步骤
1、移取20ul的标准品、质控品、血清、血浆和稀释的尿液样本至相应的孔中。
2、每孔加入100ul的酶联物。
3、每孔加入新喋呤抗血清50ul。
4、盖板,避光在振荡器(500rpm)、室温(18~25℃)下温育90分钟。
5、移去封板纸,倒出孔中溶液,洗板4次,每次每孔使用300ul稀释的洗涤液。在吸水纸上拍干。
6、对于底物液和终止液的使用,建议使用8通道的移液器,确保每孔加入的时间间隔是相同的。避免气泡的产生。
7、每孔加入150ul的底物液。
8、室温(18~25℃)下温育10分钟。
9、每孔加入150ul的TMB终止液终止反应。轻轻震动包被板使溶液混匀。
10、在15分钟内于450nm的酶标仪上读数(参考波长是600~650nm)。
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