DLAB/大龙仪器 品牌
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北京索莱宝自产免疫组化试剂 一抗稀释液
面议北京索莱宝自产免疫组化试剂 HRP标记抗体稀释液
面议索莱宝自产免疫组化试剂 AP标记抗体稀释液
面议免疫组化试剂 荧光抗体稀释液
面议索莱宝免疫组化 5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐
面议柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L,免疫组化试剂
面议免疫组化试剂 柠檬酸钠抗原修复液(1×)
面议免疫组化试剂 柠檬酸钠抗原修复液(50×)
面议北京索莱宝自产 免疫组化试剂 EDTA抗原修复液(1×)
面议北京索莱宝自产 免疫组化试剂 EDTA抗原修复液(50×)
面议北京索莱宝自产免疫组化试剂 冰冻切片抗原修复液
面议北京索莱宝自产 免疫组化试剂 细胞爬片抗原修复液
面议小鼠白细胞介素1受体拮抗蛋白ELISA试剂盒
注意事项:※※※
1. 试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。 2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱,已复溶但未用完的标准品,请丢弃。 3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30min,且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。 4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持*。 5. 为避免交叉污染,请在试验中使用 1 次性试管,枪头,封板膜(※)及洁净塑料容器。. 6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 盖上,使用前请离心处理(5-10 S 即可),使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请 用移液器小心吹打几次。 7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的试 剂代替本试剂盒中的某单个组分。 8. 为保证结果准确,每次检测均需做标准曲线。
安全提示:
试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作人员在使用时请带上手套并注意防护;在操 作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗;检测血液样本 及其它体液样本时,请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。
小鼠白细胞介素1受体拮抗蛋白ELISA试剂盒
组成及储存
自备实验器材(不提供,可代购)
1. 酶标仪(主波长 450nm,参考波长 630nm)
2. 高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板机或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 双蒸水,去离子水,量筒等
6. 稀释用聚丙烯试管
样本收集及储存:
1. 细胞培养上清: 将细胞培养基移无菌离心管,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装 于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。
2. 血清样本: 室温血液自然凝固 20 min 后,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装 于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),保存过程中如有沉淀, 请再次离心,避免反复冻融。
3. 血浆样本: 将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择 EDTA,柠檬酸钠或肝素作 为抗凝剂,混合 20 min,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。
※注意:
血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果;如果样本中的靶标 物检测浓度高于标准品的顶值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实 验以确定稀释倍数。
试剂准备:
1. 试剂回温:首先在实验前 30 min 将试剂盒,待测样本放置于室温下,浓缩洗涤液如出现 结晶,请放入 37℃温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将 20 倍 浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释:加入标准品/样本稀释液(SR1)1ml冻干标准品中,静置15分钟待 其*溶解后轻轻混匀(浓度为2000pg/ml),然后按照以下浓度:2000、1000、500、250、 125、62.5、31.25、 0 pg/ml进行稀释。复溶过的标准品原液(2000pg/ml)未用完的应 废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其贮存在-20~-80℃冰箱,具体如下图。
4. 生物素化抗体工作液:预先计算好试验所需用量,用检测稀释液(SR2)将100倍抗体浓 缩液稀释成1倍应用工作液(稀释前充分混匀),请在30分钟内加入到反应孔中。
5. 酶结合物工作液:按每次试验所需用量配制,用酶结合物稀释液(SR3)将100倍浓缩酶 结合物稀释成1倍应用工作液(稀释前离心),请在30分钟内使用。
6. 洗涤方法:
自动洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,注入洗涤液为 300ul/ 孔,注与吸出间隔为 30 秒,洗板 5 次。
手工洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔,静止 30 秒后甩净酶标板孔中液体,在厚迭的吸水纸上拍干,洗板 5 次。
结果判断:
1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行 双波长检测,请用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。
2.计算标准品、样品的平均 OD 值:每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值
3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品中IL-1RΑ含 量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。 4.若标本 OD 值高于标准曲线上限,应做适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数
2. 灵敏度: 低可检测小鼠 IL-1Rα 浓度达 15pg/ml, 20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。
3. 特异性: 不与小鼠 IFN-γ、 IL-1α 、IL-1β 、IL-1 RII、 IL-1 R4、 IL-2、 IL-3、 IL-4、 IL-5、 IL-6 、 IL-7、 IL-9 、IL-10、 IL-10 R、 IL-11、 IL-12 p70、 IL-13 、IL-17、 IL-18 反应,人 IL-1α 、 IL-1β 、IL-1 RII、 IL-1 R3、 IL-1 R4 、IL-1 R6、 IL-1 R9 等反应
4. 重复性: 板内,板间变异系数<10%
5. 回收率: 在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠 IL-1Rα,计算回收 率。
6. 线性稀释: 分别在选取的 4 份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 IL-1Rα,在标准曲线动 力学范围内进行稀释,评估线性。