葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC3325
规格: 100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂三：临用前用4 mL蒸馏水溶解备用。

2. 试剂四：临用前用4 mL蒸馏水溶解备用。

3. 标准品：10 μmol/mL磷标准液。临用前用蒸馏水稀释16倍至0.625 μmol/mL的标准溶液备用。

4. 工作液的配制：试剂二中加入5 mL试剂一充分溶解备用。可以将工作液分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

5. 定磷试剂的配制：按H₂O:试剂三:试剂四:试剂五（V:V:V:V）=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

注意事项：

1. 建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2. 若A大于1.5或者显色完成后有沉淀产生，将上清液或者粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。

3. 定磷试剂应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。

实验实例：

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得A测定管=0.254、A对照管=0.171、A空白管=0.047、A标准管=0.357，计算ΔA=A测定管-A对照管=0.254-0.171=0.083，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按样本质量计算酶活得：G6P（U/g 质量）=312.5×ΔA÷ΔA标准÷W=312.5×0.083÷0.31÷0.1=836.6935 U/g 质量。

2. 取0.1g小鼠肝脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得A测定管=0.995、A对照管=0.384、A空白管=0.047、A标准管=0.357，计算△A=A测定管-A对照管=0.995-0.384=0.611，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按样本质量计算酶活得：G6P（U/g 质量）=312.5×ΔA÷ΔA标准÷W=312.5×0.611÷0.31÷0.1=6159.274 U/g 质量。

3. 取0.1g小鼠血清稀释2倍，直接检测，用96孔板测得A测定管=0.38、A对照管=0.199、A空白管=0.047、A标准管=0.357，计算ΔA=A测定管-A对照管=0.38-0.199=0.181，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按血清计算酶活得：G6P（U/mL）=312.5×ΔA÷ΔA标准×稀释倍数=312.5×0.181÷0.31×2=364.9194 U/mL。

相关发表文献：

1. Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA methylation in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.

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