磷酸化蛋白提取试剂盒

操作方法：

1、组织总蛋白的提取

1) 在 1ml 的冷裂解液中各加入 10ul 的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和 PMSF；混匀，放置在冰上 备用；

2) 称取 0.1g 的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然 后加入 0.5-1ml 的新配置的裂解液，研磨直没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作；

3) 将组织匀浆液移入 1.5ml 的 EP 管中，4 ℃ 12000g 离心 30min；

4) 吸取上清新的管中；

5) 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。）

2、细胞总蛋白的提取

1) 裂解液的用量：107个细胞需要裂解液 1ml；

2) 贴壁细胞：弃去培养基，用冷的 PBS 洗两次，弃去 PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰 上用细胞刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入 EP 管中，颠倒裂解 20-30min。

3) 悬浮细胞：4℃ 400g 离心收集细胞，用冷的 PBS 洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋 10s，放置冰上裂解 10min，重复 3-4 次；

4) 裂解完毕之后，将细胞裂解液 4 ℃12000g 离心 30min；

5) 将上清移入新的 EP 管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。）

注意事项：

1. 实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境。

2. PSMF（有毒）现用现加，因为 PMSF 在水溶液中会快速降解。

相关文献：

《Proanthocyanidins Protect against β-Hydroxybutyrate-Induced Oxidative Damage in Bovine Endometrial Cells》 作者:Xi Cheng,Shuhua Yang,Chuang Xu, Lanzhi Li,Yi Zhang, Yang Guo, Cai Zhang, Peng Li, Miao Long,Jianbin He 期刊:Molecules. 影响因子:3.098 PMID:30678309
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影响因子:3.361 PMID:30502652
《β?elemene inhibits oxygen?induced retinal neovascularization via promoting miR?27a and reducing VEGF expression》 作者:Weilai Zhang, Lei Chen ,Jin Geng, Limin Liu, Li Xu 期刊:Molecular Medicine Reports 影响因子:1.851 PMID:30664207
 

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