Rubisco可催化核酮糖-1,5-二磷酸（RuBP）和CO2结合生成3-磷酸甘油酸，3-磷酸甘油酸可进一步在3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的催化作用下生成甘油醛-3-磷酸，反应过程中伴随着NADH氧化生成NAD+，NADH在340 nm处有特征吸收峰，通过测定340 nm处吸光度的下降速率即可表征Rubisco活性。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性检测试剂盒测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿、恒温水浴/培养箱、台式 离心机、可调式移液器、研钵/匀浆器和蒸馏水。

样品处理 ①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞到离心管内，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL） 为（500-1000）：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1 mL 提取液）处理样品，冰浴超声破碎细菌 或细胞（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 10 s，重复 30 次），4℃ 10000 g 离心 10 min，取上清置 于冰上待测。 ②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：（5-10）的比例（建议称取约 0.1 g 组织， 加入 1 mL 提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃ 10000 g 离心 10 min，取上清置于冰上待测。

二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性检测试剂盒吸光值测定：①立即混匀放入 25℃水浴或培养箱中并开始计时，测定 20 s（总时间）时 340 nm 处吸光值，记为 A1 测定和 A1 空白；②准确反应 300 s，测定 320 s（总时间）时 340 nm 处吸光值， 记为 A2 测定和 A2 空白；③计算 ΔA 测定=A1 测定-A2 测定，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白，ΔA=ΔA 测 定-ΔA 空白。注：空白组只需测定 1-2 次；准确在 20 s 和 320 s 处完成读数，以保证实验结果的准确。