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乙醇酸氧化酶试剂盒乙醇酸氧化酶(Glycolate Oxidase)是植物光呼吸过程中的关键酶,定位于细胞内过氧化物酶体 中参与乙醇酸循环,能够催化乙醇酸氧化生成乙醛酸和草酸,乙醇酸氧化酶与植物光呼吸、生长发育、 矿质营养及感病等密切相关,其活性测定对于植物光合和呼吸代谢的研究具有重要意义。 乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸能够与盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙,产物在 324 nm 处具有特征吸收峰,通过吸光值的变化即可表征乙醇酸氧化酶的活性。
乙醇酸氧化酶试剂盒①若 A1 测定大于 0.9(微量石英比色皿)或 0.5(96 孔 UV 板),建议将粗酶液使用提取液适当 稀释后再测定,计算时相应修改; ②反应体系中底物易发生自氧化,设置空白组作为试剂质量检测孔,正常情况下∆A 空白应小于 0.02,试验前可测定空白组以确定底物状态; ③准确在 10 s 和 130 s 处完成读数,以保证实验结果的准确性;若使用 96 孔 UV 板应使用多道 移液器且分批进行检测,以确保组间反应时间一致; ④为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准), 确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定, 过程中问题请您及时与工作人员联系。
超氧化物歧化酶试剂盒测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿(光径 10 mm)、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
注意事项:
①抑制百分率应在30-70%范围内,越靠近50%越准确;若抑制百分率小于30%或大于70%,则需要调整样本量后重新测定:若抑制百分率偏高,则需适当稀释样品;若抑制百分率偏低,则需适当增加样本量后再进行测定,计算时相应调整;
②待测样本和试剂二使用时在冰上放置;
③样本较多时可按表格中试剂用量配置工作液(包含试剂一、二、三),试剂五必须最后加入;
注: 为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异交的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。