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产品分类：酶类染色

储存条件：4℃,避光,3个月

用途：腺苷三磷酸酶染色

注意事项：主要由孵育液、硝酸钴、硫化铵、阴性对照孵育液等组成。酶活性部位呈棕黑色或黑色。

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

川芎（标准品） 3-Phosphoglyceric Phosphokinase白介-10受体β抗体包装250mg

川芎(标准品) d-ribulose 1,5-diphosphate/RuDP白介-12受体β1抗体包装1g

川续断皂苷VI（标准品） Acidic Protease from Aspergillus 白介-12受体β2抗体包装25g

川续断皂苷乙（标准品） Prometryn白介15受体α抗体包装5g

穿山（标准品） Sulforaphane白介17受体抗体包装25g

穿山龙（标准品） Mecobalamin白介-17B受体抗体包装5g

（标准品） (S)-Ketoprofen trometamol白介-18受体β链抗体包装1g

内酯（标准品） (S)-Ketoprofen trometamol白介21抗体包装25g

船形乌头（标准品） Phytagel白介21受体抗体包装5g

垂盆草（标准品） (S)-(+)-Ketoprofen白介-22抗体包装1g

椿皮（标准品） sulfosalicyclic acid白介29抗体包装25g

慈溪麦冬皂苷A 1-Amino-2-naphthol-4-sulfonic Acid 白介22受体结合蛋白抗体包装5g

次野鸢尾黄（标准品） 10,11-Dihydro-10-hydroxy Carbamazepine 白介-1受体相关激4抗体包装1g

甘草查尔(标准品) S-Notoginsenoside R2干扰调节因子4抗体包装5g

槐苷 Zinc acetate胰岛样生长因子1受体β/IGF-IRβ 抗体包装1g

粉红单端孢Trichothecium│roseum 质量规格：≥40%可溶性OX40L试剂盒花椒;8-Methoxypsoral

链霉菌Streptomyces│sp. 质量规格：≥50%,BR可溶性Endoglin试剂盒环氧泽泻烯;Alismoxide

Streptococcus castoreus模式菌株: 未知 质量规格：≥90%可溶性CD86试剂盒海柯皂苷元;Hecogenin
ATPase染色液Gentamicin/FITC  荧光su标记庆大霉su规格： 1ml

Tetracycline/OVA  四环su偶联鸡卵白蛋白规格： 2mg

Oxytetracycline/BSA  土霉su偶联牛血清白蛋白规格： 2mg

Oxytetracycline/OVA  土霉su偶联鸡卵白蛋白规格： 2mg

streptomycin/OVA  链霉su偶联血蓝蛋白规格： 5mg

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。