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生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品分类:细胞组分分离
储存条件:—20℃,避光,12个月
用途:主要用于裂解植物组织,提取样品中的苹果酸脱氢酶
注意事项:苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase, MDH)是合成苹果酸的关键酶之一,催化苹果酸和草酰乙酸(OAA)的相互转化,参与众多生理代谢途径如TCA循环C4循环脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等,因此MDH在植物的生长发育中发挥着重要作用,广泛存在于线粒体、细菌细胞膜上,为三羧酸循环中的一种酶,由于酶的来源不同,其某些性质也不尽相同。MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、耄Ꚙ鉩ࣘ䞧갑윊蘢ﴯ뷜䝝娂蒼ꐜ믞℁ᾟ逝
公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点,咨询并订购!
产品名称 | 规格 | 货号 |
苹果酸脱氢酶提取试剂 | 500ml | FS-R6558 |
配制与标定的实验原理:
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一种白色晶体粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂,基准试剂的预处理:称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层,然后用水洗净,烘干。
配制步骤:
1、取适量锌片放在100mL烧杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自来水、纯水洗净,烘干、冷却。
2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15~0.2g Zn,盖好小表面皿。
3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地将溶液转移至250mL容量瓶中,用纯水稀释至标线,摇匀。
实验方法与判定:
1.对照品溶液的稳定性
2.对照品溶液的配制:精密量取脑对照品适量,加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液,作为对照品溶液。
3.色谱条件:以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱;柱温120℃;进样口温度250℃;检测器温度250℃;分流进样,分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。
4.实验方法:配制的对照品溶液,一份置冷处保存,一份置室温中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液,三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法,并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来,保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%,验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
萘乙酰(标准品) Oxcarbazepine补体C4b-A蛋白抗体包装100mg
泊金酯(标准品) Oxcarbazepine磷化整合β2/Integrin β2抗体包装1g
泊金酯(标准品) Hypericin磷化整合β2/Integrin β2抗体包装5g
泊金乙酯;酯(标准品) D-(+)-Glucopyranose 6-phosphate4号染色体开放阅读框28抗体包装100g
尔雌(标准品) D-Gluconate 6-phosphate 3sodium salt 阳离子通道相关蛋白2抗体包装25g
可地尔(标准品) Azathioprine阳离子通道相关蛋白3抗体包装5g
可占替诺(烟占替诺)标准品 Barnidipine HCl液泡蛋白分选蛋白VPS13A抗体包装1g
罗替(标准品) Cefepime Hydrochloride钙调磷B相关蛋白2抗体包装1g
麦角林(标准品) Cefepime HydrochlorideCHRAC1蛋白抗体包装5g
舒(标准品) Loxoprofen sodiumATP依赖的解螺旋抗体包装1g
莫(标准品) Loxoprofen sodiumX染色体开放阅读框6抗体包装5g
莫杂质Ⅰ/2,6-二基-4-(3-基)-... Paeonol硫软骨2抗体包装1g
群(标准品) Paeonol碳化合物磺基转移10抗体包装5g
群杂质A(标准品) Rotundine/ L-Tetrahydropalmatine碳化合物磺基转移11抗体包装1g
索(标准品) Liranaftate碳化合物磺基转移12抗体包装250g
根瘤菌Rhizobium│sp. 质量规格:HPLC>98%,标准品间粘附分子2试剂盒丝石竹皂苷元3-O-B-D葡萄糖酯
香菇Lentinula│edodes 质量规格:>99%,EP5.0间粘附分子1试剂盒L-鼠李糖;L(+)-Rhamnose
CBS277.70=ATCC22054资源名称: 森正青霉 质量规格:HPLC>99%,标准品性T淋巴相关抗原4试剂盒松香;Abietic Acid
苹果酸脱氢酶提取试剂PERK/FITC 荧光标记蛋白激R样内质网激IgG钠,无水 AR,99.0%
Phospho-PERK (Thr980)/FITC 荧光标记化蛋白激样内质网激IgG钠,无水 99.99% metals basis
peripherin/FITC 荧光标记外周蛋白IgG锌,二水 AR,99.0%
HSP-27/HRP 辣根过氧化物标记热休克蛋白27IgG锌,二水 CP,98.0%
P-fscn1/FITC 荧光标记化纤维束蛋白同源物1/肌动蛋白集束蛋白/圆线虫紫癜 IgG锌,二水 99.99% metals basis
PG-C/FITC 荧光标记胃蛋白原CIgG锌,二水 99.995% metals basis
PGC-1 Alpha/FITC 荧光标记过氧化物体增殖物激活受体γ辅激活子1αIgG无水醋锌 CP,99.0-1.0%
PGE2/FITC 荧光标记前列腺E2IgG2-酰吡啶 98%