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产品分类：蛋白检测

储存条件：室温,12个月

用途：专门用于双缩脲法蛋白定量,通过1、 酶标仪或分光光度计进行蛋白的精确定量分析

注意事项：主要由硫酸铜、酒石酸钠、碘hua钾等组成。

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

酿酒酵母周期蛋白SG2N抗体Anti-GAA Antibody心肌型兰定受体2(RYR2)

考克氏菌STRN4蛋白抗体Anti-GAB1 Antibody心肌(MYOCD)

钩状木霉钠离子通道蛋白7α/Na+ CP type VIIα抗体Anti-GABRA1 Antibody心肌肌钙蛋白T(TNNT2)

平滑假丝酵母电压门控钠通道SCN3α蛋白/Na+ CP type IIIα抗体Anti-GABBR1 Antibody心肌肌钙蛋白I(TNNI3)

乳白耙菌神经元电压门控钠通道蛋白β2/Na+ CP type IIβ抗体Anti-GAD1 Antibody心肌肌动蛋白α1(ACTC1)

金顶侧耳红膜蛋白STOM抗体Anti-GABRB3 Antibody心肌钙黏蛋白(CDHH)

短小芽孢杆菌钠依赖性脯转运PROT抗体Anti-GAD1 Antibody斜方蛋白1(RHOM1)

酿酒酵母基转运蛋白2抗体Anti-GAD2 Antibody小异二聚体伴侣(SHP)

紫丁香蘑溶质载体蛋白家族35成员C2抗体Anti-GAD2 Antibody小亚基钙蛋白1(CAPNS1)

中国台湾根霉转绿激活蛋白SRCAP抗体Anti-GADD45A Antibody小蛋白γ(PARVγ)

放射形根瘤菌上皮特异性ETs转录因子抗体Anti-GAD2 Antibody小蛋白β(PARVβ)

污黑腐皮壳纤溶原激活物抑制因子2/血浆原激活抑制因子-2抗体Anti-GADD45A Antibody小蛋白α(PARVα)

华丽侧耳 (佛罗里达侧耳)SLFNL1抗体Anti-GADD45G Antibody小脑肽4(CBLN4)

链球菌(不定种)SCN2A抗体Anti-Galactosidase alpha/Gla Antibody小脑肽3(CBLN3)

侧耳SEL1L抗体Anti-GAL Antibody小脑肽2(CBLN2)

巴博乳杆菌SCN1A抗体Anti-Galectin 2/LGALS2 Antibody小脑肽1(CBLN1)

钠碘转运体蛋白8抗体胶质芽胞杆菌人椎间盘髓核细胞

组蛋白甲基转移SMYD4抗体烟草节杆菌人滑膜细胞

丝/苏蛋白激38抗体毛头鬼伞（鸡腿菇）人骨骼肌卫星细胞

分选连接蛋白1抗体离褶伞（松毛菇）人肺大静脉平滑肌细胞
双缩脲总蛋白试剂细胞培养污染性支原体M.arginini鉴定16S rDNA20次人胚肺成纤维；HFL1小鼠催产（OT）ELISA试剂盒,

PCR扩增检测试剂盒人胚肾；293 [HEK-293]小鼠抑瘤M（OSM）ELISA试剂盒,

细胞培养污染性支原体A.laidlawii鉴定16S rDNA20次人羊膜；HA小鼠中性粒弹性蛋白酶（NE）ELISA试剂盒,

PCR扩增检测试剂盒人胚肺成纤维；HFL-I小鼠抗受体（ATR）ELISA试剂盒,

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。