产品分类：蛋白提取

储存条件：—20℃,12个月

用途：温和裂解细胞提取总蛋白质,主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等

注意事项：主要由NP-40、氯化钠、Tris组成,NP-40为常用的去污剂之一。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点，咨询并订购！

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。

中国克鲁维酵母淋巴管内皮和血管内皮受体1抗体Anti-Ferritin Antibody血栓烷受体(TP)

露湿漆斑菌鞭毛蛋白2抗体Anti-FES Antibody血栓A2(TXA2)

硬结节杆菌跨膜蛋白SEMA5A抗体Anti-FFAR1 Antibody血色病蛋白(HFE)

香菇IQCJ抗体Anti-FGA Antibody血清淀粉样蛋白A2(SAA2)

粪肠球菌*SH2结构域蛋白C3抗体Anti-FGA Antibody血清淀粉样P物质(SAP)

日本色盐杆菌2型猪链球菌溶血抗体Anti-FGB Antibody血浆过氧化物(GPX3)

解鸟克雷伯菌肺表面活性蛋白A抗体Anti-FGF1 Antibody血红氧合2(HO2)

绿色链霉菌肺表面活性蛋白A抗体Anti-FGF1 Antibody血红氧合1(HO1)

多粘类芽孢杆菌葡萄糖-6磷转运蛋白抗体Anti-FGF1 Antibody血红结合蛋白(HPX)

枯草芽孢杆菌线粒体琥珀脱氢D抗体Anti-FGF1 Antibody血红蛋白μ(HBμ)

丛毛红曲类固硫酯抗体Anti-FGF10 Antibody血红蛋白θ1(HBθ1)

腐质霉固调节元件结合蛋白裂解激活蛋白抗体Anti-FGF10 Antibody血红蛋白ζ(HBζ)

伞枝犁头霉转运蛋白家族39成员7抗体Anti-FGF13 Antibody血红蛋白ε1(HBε1)

迪吉氏黄杆菌碳氢钠协同转运蛋白4-A4突变型抗体Anti-Fgf19(Fgf15) Antibody血红蛋白δ(HBδ)

木贼镰刀菌磷化认知缺陷突触相关蛋白SynGAP抗体Anti-FGF19 Antibody血红蛋白γ2(HBγ2)

Sphingobium fuliginis Syndecan 3蛋白抗体Anti-FGF19 Antibody血红蛋白γ1(HBγ1)

染色体结构维持蛋白2抗体空肠弯曲菌hFoB1.19:SV40转染人成骨细胞

染色体结构维持蛋白5抗体液化MGC80-3人胃癌细胞

染色体结构维持蛋白6抗体黑曲霉 ACHN人肾癌细胞

SLAMF6抗体浅白隐球酵母3T3-L1小鼠脂肪细胞
NP-40裂解液（0.25%）乙二胺四乙酸混合液100毫升人皮肤成纤维；CCC-HSF-1Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）ELISA试剂盒--动物，人

乙二胺四乙酸（EDTA）细胞脱离溶液100毫升人羊膜；WISHEB病IgA（EBv IgA）ELISA试剂盒--动物，人

Hanks平衡盐缓冲溶液（HBSS）500毫升人胚肺成纤维；CCC-HPF-1登革热（DF-Ab）ELISA试剂盒--动物，人

Hanks钙镁平衡盐缓冲溶液（HBSS）500毫升人胚皮肤成纤维；CCC-ESF-1小鼠血浆α颗粒膜蛋白（GMP-140）ELISA试剂盒,