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产品分类：细胞其他

储存条件： -20℃,3个月

用途：又名Tyrod-葡萄糖冷冻保护剂，用于精子的冷冻保护,减少因冷冻造成精子的死亡。精子冷冻保护剂的一种，不含卵黄。主要用于少精子症标本和手术取精的冷冻方案。

注意事项：无菌溶液。含有葡萄糖、甘油、人血清白蛋白、Tyrode溶液，无卵黄等。

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

酰次乌头原碱（标准品） Myokinase癌基因ERG3抗体包装1g

酰基戈米辛O Phosphodiesterase II from Bovine Spleen猪源产肠性大肠杆菌K88-K99抗体包装25g

酰芍药苷(标准品) SuccinimideFAS凋亡抑制分子3抗体包装5g

酰乌头原碱（标准品） 5-Bromouridine纤维束1抗体包装25g

酰新乌头原碱（标准品） ADA buffer, disodium salt叉头蛋白P3抗体包装5g

酰氧化芍药苷 Albumin, from bovine Protease free免疫球蛋白G Fc段受体I包装1g

比灵,右旋荷包牡丹碱（标准品） Aluminum stearate叉头蛋白M1抗体包装5g

荜茇（标准品） Bismuth(III) nitrate pentahydrate磷化雷帕霉靶蛋白抗体包装500ml

荜澄茄（标准品） Calcium phosphate, dibasic, dihydrate磷化粘着斑激抗体包装100ml

蓖麻子（标准品） Cerium(III) carbonate, hydrate丝聚合蛋白/中间丝蛋白抗体包装25ml

蝙蝠葛碱(标准品) Chymotrypsinogen A肺鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白抗体（C端）包装10g

蝙蝠葛诺林碱(标准品) Cibacron blue 3G-A13抗体(纤维蛋白稳定因子)包装50g

蝙蝠葛苏林碱(标准品) DEAE Dextran滤泡树突分泌蛋白抗体包装25g

扁柏双黄(标准品) Fluridone纤维母生长因子13抗体包装5g

扁桃苷/苦杏仁苷(标准品) Histamine骨骼肌肌球蛋白轻链2抗体包装100g

浅灰链霉菌Streptomyces│griseolus 质量规格：>97%,BR瘦试剂盒染料木;Genistein

白乳菇Lactarius│piperatus (L.) Pers. 质量规格：HPLC>99%,标准品受体型酪蛋白磷样N试剂盒;

鸭瘟病毒Alphaherpesvirinae│Duck plague virus 质量规格：≥99.0%受体TNFRSF结合丝苏激2试剂盒 IIb;Escin IIb
改良精子冷冻保护剂TGF- Beta3/FITC  荧光标记转移生长因子–β3IgG

TGF- BetaR1/ALK /FITC  荧光标记转移生长因子–β受体1IgG

TGF- BetaR 2/FITC  荧光标记转移生长因子–β受体2IgG

TGF- BetaR 3/FITC  荧光标记转移生长因子–β受体3IgG

TGM3/FITC  荧光标记转谷氨酰3IgG

Thioredoxin 1/FITC  荧光标记硫氧还蛋白IgG

Thymosin Alpha-1/FITC  荧光标记 α-1IgG

Tie1/FITC  荧光标记血管生成-1受体IgG

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。