Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增强型ECL化学发光检测试剂盒 | 36222ES60 | 100 mL | 325.00 |
36222ES76 | 500 mL | 1255.00 |
产品描述
增强型ECL化学发光检测试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。
本试剂盒采用了*的发光底物系统,降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂,大大提高试剂盒的稳定性,使其在室温能稳定放置一年。除用于X光片,还可直接使用荧光CCD扫描,主要用于WB检测以及化学发光免疫检测系统。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
36222ES60(100 mL) | 36222ES76(500 mL) | ||
36222-A | A液 | 50 mL | 250 mL |
36222-B | B液 | 50 mL | 250 mL |
运输与保存方法
常温运输。
频繁使用可置于室温保存,一年稳定;长期不用,建议置于4 ºC保存延长效期。【注】:A液(36222-A)需避光保存!
操作方法(以X光胶片为例)
1. 执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。
【注】:ECL发光液是HRP的显色底物,因此检测系统终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。
2. 后1次洗膜的同时,新鲜配制发光工作液(推荐100-200 μL发光液/cm2膜):分别取等体积的A液和B液,混匀备用。
【注】:取A液和B液一定要用不同的枪头;另建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液,勿使膜*干燥。用移液器将工作液加到膜上,使之充分接触。室温孵育1-2 min,准备立即压片曝光。
4. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜*干燥。
5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来*包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。
6. 暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上,压片,曝光30 sec-2 min,显影定影冲洗。【注】:曝光时间需根据曝光强度做相应的调整。若是背景过高,可使用两张X光胶片同时压片。
其他曝光方法
如果使用CCD拍照:可以将膜放置于工作液中,开机后按照使用说明,将膜取出,进行拍照。另外,也可以根据情况,调整机器测量参数,提高信噪比。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)转膜、封闭、孵育都需要避免气泡,另外戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。
3)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
4)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
5)避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
6)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7)使用生物素-亲和素系统,避免使用牛奶封闭,可能会导致背景过高。
8)金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。
9)(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。
10)本品无特殊毒性,按普通化学品处理。
问题与解决方案
遇到的问题 | 原因分析 | 推荐解决方法 |
胶片无条带显现或者信号较弱 | 转膜的效率低 | 提高转膜效率,用预染Marker判断。 |
抗原/抗体量少或不匹配 | 增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体 | |
X光胶片有问题 | 曝光后X光谱全黑(而非透明色),则表明胶片已*曝光,使用新的X光片 | |
显影/定影液有问题 | 可预先曝光一张胶片进行判断,如有问题当换用新的显影/定影液 | |
反应系统中HRP量过多 | 稀释HRP标记物 | |
X光片背景脏 | 一抗二抗浓度太高 | 降低抗体浓度,延长封闭时间 |
抗体未清洗干净 | 增加洗膜次数 | |
条带有空斑 | 抗原以及二抗的浓度过高 | 稀释样品重新跑胶,也可将混合好的显色液冰浴后,加到膜上即刻快速显色。 |
带型不规则 | 转膜有气泡或甲醇(对于PVDF膜)水化不均匀 | 优化转膜条件。 |
相关产品
产品名称 | 产品编号 | 规格( mL) | 价格(元) |
Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit 增强型ECL化学发光检测试剂盒 | 36222ES60/76 | 100/500 | 325/1255 |
Super ECL Detection Reagent ECL化学发光超敏显色试剂盒 | 36208ES60/76 | 100/500 | 395/1655 |
SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate持久性化学发光底物 | 36223ES10/60/70/76 | 10/100/200/500 | 267/1557/2857/5257 |
SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate高灵敏度化学发光底物 | 36224ES10/60/70/76 | 10/100/200/500 | 287/1757/3257/5857 |
HB181130