产品简介

总胆//固//醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含胆//固//醇的总和，包括游离胆//固//醇（Free Cholesterol，FC）和胆//固//醇酯（Cholesteryl Ester，CE）。本试剂盒的检测方法是微量法，既可以用可见分光光度计检测，也可以用酶标仪检测。该产品的检出限是0.143 μmol/mL，线性范围为0.156-5 μmol/mL。

作用原理是通过酯酶催化胆//固//醇酯水解生成游离胆//固//醇（FC）和游离脂//肪酸（FFA），从而把胆//固//醇酯转化为FC；进一步利用胆//固//醇氧化酶催化FC氧化，生成4-胆甾烯酮和H2O2；最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安//替//比//林和酚，生成红色醌类化合物，其在500 nm有特征吸收峰，颜色深浅与TC含量成正比。作用方式如下：

测定总胆//固//醇(TC)请选择60723ES 总胆//固//醇(TC)含量检测试剂盒；测定游离胆//固//醇(FC)请选择60724ES 游离胆//固//醇(FC)含量检测试剂盒。

产品信息

组分信息

储存条件

2~8℃保存，有效期6个月。

使用说明

【注意事项】实验之前建议选择3个预期差异大的样本做预实验，如果样本吸光值不在测量范围内，建议稀释或者增加样本量进行检测。

1. 需自备的仪器和溶剂：

可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、可调式移液枪、EP管、蒸馏水和异丙醇。

2. 溶液的配制：

1）自备提取液异丙醇：大约需要110 mL，常温保存；试剂盒内提供一个30 mL棕色空瓶，仅做分装使用。

2）标准品溶液的配置：10 mg胆//固//醇使用前加入517 μL提取液，振荡溶解后即为50 μmol/mL的胆//固//醇标准溶液，2~8℃可保存4周。

3）试剂三液体置于试剂瓶内EP管中。

4）工作液的配制：根据样本量将试剂一、试剂二、试剂三按照3 mL、20 μL、3 μL的比例配制工作液，约为16 T，现用现配。

3. 操作步骤

1）样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

a. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1 g组织，加入1 mL提取液）进行冰浴匀浆。10000 g，4℃离心10 min，取上清置冰上待测。

b. 细菌/细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1 mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300 w，超声2秒，间隔3秒，总时间3 min）；然后10000 g，4℃离心10 min， 取上清置于冰上待测。

c. 血清（浆）等液体样本：直接测定，若有沉淀请离心后取上清待测。

2）测定步骤

a. 可见分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至500 nm，分光光度计蒸馏水调零。

b. 标准溶液的稀释：将50 μmol/mL胆//固//醇标准溶液用提取液进行稀释，得到2.5、2、1.25、0.625、0.3125、0.15625 μmol/mL的标准溶液备用。

c. 标准溶液稀释可参考下表：

注：实验中每个标准管需20 µL标准溶液。

d. 在1.5 mLEP管/96孔板按下表步骤加样

3) 总胆//固//醇含量计算

a. 标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。

b. 总胆//固//醇含量的计算：

（1）按血清（浆）等液体体积计算：TC含量（μmol/dL）=x×100

（2）按样本蛋白浓度计算：TC含量（μmol/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提取）=x÷Cpr

（3）按样本质量计算：TC含量（μmol/g 质量）=x×V提取÷W=x÷W

（4）按细胞/细菌数量计算：TC含量(μmol/104 cell)=x×V提取÷500=0.002x

100：单位换算系数，1 dL=100 mL；V提取：加入样本的提取液体积，1 mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

4. 实验实例：

取鼠血清样本，直接按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A空白=0.092-0.048=0.044，根据标准曲线y=0.4331x-0.0623，计算 x=0.2454，按血清（浆）等液体体积计算：TC 含量（μmol/dL）=x×100=0.2454×100=24.54 μmol/dL。

注意事项

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者用提取液稀释样本后再进行测定，但注意同步修改计算公式。

2. 提取液中含有使蛋白变形的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！