Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit

100次Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit

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具体成交价以合同协议为准
2023-03-15 09:07:32
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

细胞衰老(Cell senescence)是细胞控制其生长潜能的保障机制,一般含义是复制衰老(Replicative senescence,RS),指正常细胞经过有限次数的分裂后,停止分裂,此时细胞虽然是存活的,但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。

详细介绍

HB170227

Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit

细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit

细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒

40754ES60

100次

-20℃

780.00

产品描述

细胞衰老(Cell senescence)是细胞控制其生长潜能的保障机制,一般含义是复制衰老(Replicative senescence,RS),指正常细胞经过有限次数的分裂后,停止分裂,此时细胞虽然是存活的,但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括:1)不可逆的生长停滞;2)与衰老相关的β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal)的活化。作为溶酶体内的水解酶,通常在pH 4.0的条件下表现活性,但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性,且随着传代次数的增加,细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。

本试剂盒正是基于SA -β-gal活性变化的生物学特征而设计的,以X-Gal为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下生成深蓝色产物,从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。

本试剂盒可以培养细胞的衰老检测,也可以用于组织切片的衰老检测。产品性能稳定,参数经优化,着色敏感,特异性高。仅对衰老细胞进行染色,不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。

产品组分

组分编号

组分名称

规格

保存

40754-A

β-半乳糖苷酶染色液A

1 ml

-20℃保存

40754-B

β-半乳糖苷酶染色液B

1 ml

-20℃保存

40754-C

β-半乳糖苷酶染色液C

100ml

-20℃保存

40754-D

β-半乳糖苷酶染色固定液

100 ml

-20℃保存

40754-E

X-Gal溶液

5 ml

-20℃避光保存

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,一年有效,其中X-Gal溶液需避光保存。

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2)本试剂盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蚀性和毒性,操作时请注意小心防护。

3)细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值,不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。

4)40754-B刚溶解后会观察到有沉淀,属正常现象,充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解,之后才能用于染色实验。配置染色工作液时,也可能有少量絮状沉淀出现,震荡混匀后就会*溶解。在染色前一定要确保所有的试剂处于*溶解状态。

5)X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在4ºC冰箱保存,但也需避免光照。

 

 

 

使用方法

  1. 实验前的准备工作:
  1. 染色工作液配制

实验开始前,将试剂盒内各组分从冰箱内取出,*溶解。其中X-Gal溶液置入冰槽里等待溶化。根据表1进行染色工作液的配置,实验体系类型,检测样本数,统一配制单次实验需要的染色工作液总量。

β-半乳糖苷酶染色液A

10μl

β-半乳糖苷酶染色液B

10μl

β-半乳糖苷酶染色液C

930μl

X-Gal溶液

50μl

【注】配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器,对于二者的判定:聚丙烯容器可高压灭菌,而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌,一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行,如细胞培养常用的6孔板。

  1. 6孔细胞培养板染色(贴壁细胞):

1)吸除细胞培养液,用PBS/HBSS洗涤细胞1次,加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液。室温固定15min。

2)吸除固定液,用PBS/HBSS洗涤细胞3次,每次3min。

3)吸除PBS/HBSS,每孔加入1ml预热的染色工作液,覆盖整个生长表面。

4)37℃孵育过一晚上,可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。

5)普通光学显微镜下观察和计数:表达SA β-gal的细胞为阳性细胞,呈现蓝色。如不能及时观察计数,可以去除染色工作液,加入2ml PBS缓冲液,4℃可以保存数天,或者加入封片剂封片后,4℃可保存较长时间。

  1. 悬浮细胞染色:

1)离心收集细胞至1.5ml离心管内,用PBS/HBSS洗涤1次,加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动,以避免细胞结成团块。

2)离心,吸除细胞固定液,用PBS/HBSS洗涤细胞3次,每次3min。

3)离心,吸除PBS/HBSS,每管加入0.5-1ml预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

4)37℃孵育过一晚上。

【注】37℃孵育不能在CO2培养箱中进行,因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。

5)取部分染色好的细胞,滴加到载玻片上或6孔板内,普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数,可以离心,去除染色工作液,加入1ml PBS缓冲液,4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片,加上封片剂封片后,4℃可保存较长时间。

  1. 组织切片染色:

1)对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行;

2)加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于15min。

3)用PBS浸泡洗涤组织3次,每次不少于5min;

4)吸除PBS,加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。

5)37℃孵育过一晚上,可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发,把整个切片浸泡在染色工作液中。

6)普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数,加上封片剂封片后4℃可保存较长时间。

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