产品信息

产品描述

真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟|嘌|呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟|嘌|呤帽结构（m7Gppp）连接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲|硫|氨|酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，并且保证正确的方向。

Capping Buffer 牛痘病毒加帽酶加帽缓冲液是经过优化后的10×Capping Buffer，按照GMP工艺要求生产，产品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5'末端标记反应。

产品性质

【注】：具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告。

运输和保存方法

冰袋运输，-20℃保存，有效期1年。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

2. 所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬；

3. 在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构；

4. 对于已知5'末端结构的RNA，可以延长反应时间至60 min，提高加帽效率；

5. 5'末端标记反应体系中，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。

Capping Buffer 牛痘病毒加帽酶加帽缓冲液

使用方法

1. 加帽反应（反应体系20 μL）

本步骤适用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反应，且可根据实验需要放大。

1）取10 μg RNA至1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至15 μL；

2）65℃加热5 min；

3）取出离心管置于冰上5 min；

4）依次加入以下组分：

【注】：10×Capping Buffer配方为：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0，50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。

5）37°C孵育30 min；

6）RNA加帽完成，可进行后续实验。

2. 5'末端标记反应（反应体系20μL）

本步骤适用于5'末端带有三磷酸的RNA标记，且可根据实验需要放大，其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。

1）取适量RNA到1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至14 μL；

2）65℃加热5 min；

3）取出离心管置于冰上5 min；

4）依次加入以下组分：

【注】：GTP mix为GTP和少量标记物，其中GTP使用浓度参照注意事项5）。

5）37°C孵育30 min；

6）RNA 5'末端标记完成，可进行后续实验。

HB220316