Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷
¥3682×Hieff 即用型的常规PCR预混液(含染料)
面议qPCR SYBR Green Mix(实时荧光定量)
面议实时荧光定量qPCR预混液(SYBR Green Mix)
面议Hieff qPCR SYBR Green Mix(qPCR预混液)
面议萤火虫荧光素酶报告基因检测试
面议Agarose琼脂糖
¥158高保真DNA聚合酶
面议PCR Enhancer PCR增强剂
面议多片段一步法快速克隆试剂盒
¥410qPCR SYBR Green Master Mix(实时荧光定量)
面议Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA
面议产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit | 13906ES65 | 100 T | 1,795.00 |
13906ES80 | 1,000 T | 15,795.00 | |
13906ES92 | 10,000 T | 135,795.00 |
产品描述
本产品将LAMP可视光染料整合到buffer中,buffer中含dATP、dCTP、dGTP和dUTP等Bst II DNA Polymerase扩增必须的组分,同时包含pH 敏感指示剂,试剂盒含有无甘油Bst II DNA Polymerase、UDGase、RT enzyme等,可用于冻干反应体系的配制;同时减少了加样操作,降低操作误差,在极大程度上抑制假阳性反应,提高检测的准确度。本试剂盒具有较高的扩增效率和灵敏度,扩增结果可肉眼判断,阳性反应孔为橙黄色,阴性反应孔为洋红色,反差极大。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | ||
13906ES65 (100 T) | 13906ES80 (1,000 T) | 13906ES92 (10,000 T) | ||
13906-A | 2.5×pH Sensitive Reation Buffer | 1 mL | 10 mL | 100 mL |
13906-B | 无甘油RT酶Mix | 30 μL | 300 μL | 3 mL |
13906-C | 无甘油Bst酶 | 50 μL | 500 μL | 5 mL |
运输和保存方法
Part I:组分13906-A【2.5×pH Sensitive Reation Buffer】干冰运输,-20°C保存,有效期6个月。
Prat II:组分13906-B\C【无甘油RT酶Mix\Bst酶】冰袋运输,4°C保存,有效期6个月。
注意事项
1. 使用本试剂前请仔细阅读说明书。
2. 整个实验,应规范操作,包括反应体系的配制、样本处理及加样。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 待检样本准备
核酸提取后样本:直接作为模板,加入反应体系中。
煮沸法:临床采集的拭子样本直接放入水中,置于95°C水浴锅或金属浴中进行5 min的热裂解,释放核酸,混匀后即可作为模板加入反应体系中。
【注】:1)处理样本的试剂不能使用强酸或强碱的核酸释放剂,若必须使用,则样本处理完后,需将样本的pH调节至8.0。
2)加入的样本中,避免使用Tris-HCl等高浓度的缓冲体系,避免pH指示剂不能发生变色,影响实验结果判读。
2. 反应体系
将A组分从-20°C取出,溶解后颠倒混匀,瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品量,配制如下体系(通常实验需要设置阴性对照和阳性对照):
组分 | 单次反应体积(μL) | 终浓度 |
2.5×pH Sensitive Reation Buffer | 10 | 1× |
Bst酶 | 0.5 | 0.32 U/µL |
RT酶Mix | 0.3 | - |
10×Primers 2 | 2.5 | 1× |
模板3 | 10 ng-1 µg | - |
加ddH2O至 | 25 | - |
【注】:
1)阴性对照推荐设置空白(不加模板)对照以及NTC(一般为水)对照。
2)10×Primers:16 µM FIP/BIP,2 µM F3/B3,4 µM Loop F/B each。
3)模板加入量在1-8 µL内调整;推荐模板RNA溶解于DEPC水中。
3. 加样
1)如果反应是在水浴锅中进行,则每管加入20 μL矿物油(自备),以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在PCR仪中进行,不需要加矿物油(请开启热盖)。
2)为避免污染,建议用户在超净台中配制组分,在其他房间的通风橱中加入模板以免出现假阳性结果。
3)由于本试剂使用的是pH指示剂法,该试剂中的缓冲液能力较弱,试剂不可长期接触空气,否则会吸附空气中的二氧化碳致使试剂变酸,导致试剂颜色变浅,影响实验结果判读。
4. 反应条件
温度 | 时间 | 作用 |
25-37°C | 2-5 min | 降解含U模板 |
60-65°C | 30 min | 恒温扩增 |
85°C | 5 min | 失活 |
【注】:
1)本试剂盒所用酶对温度非常敏感,强烈建议使用PCR仪操作;如用水浴锅,应先加热使其达到规定温度后再反应。温差超过2°C,将导致扩增效率降低,使阳性反应无法在说明书规定的时间内洋红色变成橙黄色。
2)反应温度需要根据引物的Tm值进行调整。
3)反应时间依据模板浓度而定,低浓度模板可能需要60 min时间才能有比较明显的反应。
5. 结果判断
反应30 min后,立刻取出反应管,待降温至室温后,置于光线良好的环境中观察(建议以白纸作为背景)。如反应液为洋红色,则为阴性结果;如反应液为橙黄色则为阳性结果。
【注】:反应的时间必须准确计时,超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。反应管不可开盖,否则会污染,影响后续实验。
HB220518