产品信息

产品描述

Hieff Canace^® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了*的延伸因子，扩增速度达到15 sec/kb。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有*的扩增效率和广泛的模板适应性，非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品组分

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

活性定义

用活性化的大马哈鱼DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

切口酶残留检测：10 U本品和0.5 μg IL23R质粒，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

PCR反应体系（推荐冰上配制）

【注】：
1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。

2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。

3）聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

4）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

5）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

6）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：

PCR扩增程序

【注】：
1）预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。

2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3）延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间推荐如下：质粒DNA等简单模板为15 sec/kb；cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb，根据实际情况可延长至40 sec/kb。

4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端，产物直接用于克隆，请使用平末端连接载体。

应用实例

图1： Hieff Canace^® 高保真DNA聚合酶扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板：拟南芥基因组DNA，50 ng/50 μL；退火温度：60℃；延伸时间：30 sec/kb。M：1 kb ladder；1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。

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