MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Prepara

18464ESMolPure® Magnetic Residual DNA Sample Prepara

参考价: ¥1355

具体成交价以合同协议为准
2023-12-15 18:29:20
163
属性:
供货周期:两周;应用领域:医疗卫生,生物产业;
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规格:
25T;
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产品属性
供货周期
两周
应用领域
医疗卫生,生物产业
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MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Prepara

参考价: ¥1355

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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用的磁珠和精心优化的缓冲体系,可最大限度的分离纯化样本中的微量宿主细胞残留DNA。

该前处理试剂盒可与本公司的多种宿主细胞DNA残留(qPCR法)检测试剂盒配合使用,包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41301ES)、HEK29

详细介绍

MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用的磁珠和精心优化的缓冲体系,可最大限度的分离纯化样本中的微量宿主细胞残留DNA

该前处理试剂盒可与本公司的多种宿主细胞DNA残留(qPCR法)检测试剂盒配合使用,包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41301ES)HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41302ES/41306ES)Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41303ES)E.coli残留DNA检测试剂盒(Cat#41304ES/41308ES)SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒(Cat#41310ES)和复制型慢病毒(RCL)检测试剂盒(Cat#41311ES)

 

产品组分

类别

组分编号

组分名称

产品编号/规格

18464ES25 (25T)

18464ES60 (100T)

Part I

18464-A

蛋白酶K20 mg/mL

0.5 mL/×1

1 mL/×2

Part 

18464-B

磁珠悬浮液

0.5 mL/×1

mL/×2

18464-C

裂解液

2.5 mL/×1

10 mL/×1

18464-D

结合液

10 mL/×1

40 mL/×1

18464-E

洗涤液A*

8 mL/×1瓶(需加12 mL乙醇)

32 mL/×1瓶(需加48 mL乙醇)

18464-F

洗涤液B*

4 mL/×1瓶(需加16 mL乙醇)

16 mL/×1瓶(需加64 mL乙醇)

18464-G

洗脱液

2.5 mL/×1

10 mL/×1

Part Ⅲ

18464-H

糖原

225 uL/×1

900 uL/×1

18464-I

Poly A钾盐

150 uL/×1

600 uL/×1

 

运输和保存方法

1.Part I组分冰袋运输4℃可保存1长期保存于-20℃

2.Part II组分室温运输,室温保存,有效期1

3.Part Ⅲ组分干冰运输,-20℃保存1年。

4. 收到货后,请检查Part IPart IIPart Ⅲ3个组分是否齐全,并立即放入对应的保存温度中储存。

 

注意事项

1. 使用前请详细阅读使用说明书,严格按照使用说明书操作,样本处理建议在超净台或生物安全柜中进行。

2. 注意观察常温保存溶液是否有析出或浑浊(尤其冬季室温为低温环境时),可37℃水浴至溶液澄清,避免影响使用效果。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留,吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

4. 处理样本及加样时,勤换枪头,避免交叉污染。

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途

 

实验前准备

1. 自备设备:漩涡振荡器、水浴锅或金属浴、离心机、磁性分离架、杭州奥盛Auto-Pure32A自动化核酸提取仪或其他品牌全自动化核酸提取仪。

2. 自备耗材:10μL-1000μL不等的低吸附带滤芯枪头、1.5 mL低吸附离心管、PCR 8连管或96孔板及相应的管盖或覆膜。

3. 自备试剂:无水乙醇(分析纯)、1×PBS缓冲液(pH 7.4,无Mg2+Ca2+)、超纯水。

【注】:推荐您购买本公司的超纯水(Cat#10116ES)

4. 使用时,需在洗涤液A*和洗涤液B*瓶中加入标签或说明书中注明体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。

每次使用后将瓶盖盖紧,以保持瓶中的乙醇含量。

 

一、手工提取操作方法

1. 样本处理

1.1 待测样本为疫苗等本身含有较高的核酸含量的样本,可用1×PBSpH 7.4,无Mg2+Ca2+)对样本进行适当比例稀释后提取对样本进行稀释是为了保证检测的准确性,使样本的检测值在标准曲线线性范围内,稀释倍数通常不超过100倍)

1.2 待测样本为干粉,可用超纯水将样本稀释10~100 mg/mL后使用。

1.3 待测样本为复杂背景基质,可根据需要进行加标回收实验,以确定合适的样本稀释倍数。

2. 100 μL样本装于1.5 mL离心管中,加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K,涡旋混匀10 sec后短暂离心

【注】:样本蛋白浓度0~100 mg/mL,蛋白酶K用量为10 μL;样本蛋白浓度100~200 mg/mL,蛋白酶K用量为20 μL

3. 将离心管置于60℃孵育30 min75℃孵育15min

【注】:若金属浴升温较快,可在同一个金属浴上孵育;若升温慢,则需提前准备2个金属浴,并将温度分别调至60℃75

4. 孵育完成后,加入400 μL结合液、9 μL糖原和6 μL Poly A钾盐涡旋混匀。

5. 加入20 μL磁珠悬浮液,涡旋混匀后,放置10 min,每隔min涡旋混匀10 sec

【注】:磁珠使用前需涡旋混匀,保证磁珠重悬。在一次性加样4~5次后,建议再次混匀后再行加样。

6. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1~2 min,待磁珠吸附,小心吸液体。

7. 700 μL洗涤液A(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),涡旋混匀1 min,确保磁珠分散,离心管壁无聚集磁珠。

8. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1~2 min,待磁珠吸附,小心吸液体。

9. 加入700 μL洗涤液B(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),涡旋混匀1 min,确保磁珠分散,离心管壁无聚集磁珠。

10. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1~2 min,待磁珠吸附,小心吸取体。

11. 为保证尽量吸出残留液体,可将离心管快速离心10 sec后,置于磁力架上用10 μL移液器吸出残留液体。

12. 打开管盖,室温37℃放置5~10 min直至乙醇挥发磁珠表面无反光至刚出现龟裂可,不可过度干燥

13. 将离心管从磁力架上取下,加入100 μL 65℃预热的洗脱液,振荡混匀短暂离心,65孵育5 min,期间振荡混匀1次。

14. 短暂离心后,将离心管放置于磁力架上静置2 min,待磁珠吸附,小心将DNA溶液转移至新的离心管中,保存于-20℃,长期保存需放置于-80℃

 

二、半自动化提取操作方法

配套本公司自动化仪器使用,以32通道核酸提取仪为例不同品牌和型号的仪器,试剂加入方式可能会有差别,本公司技术人员

1.样本处理

1.1 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本,可用1×PBSpH 7.4,无Mg2+Ca2+对样本进行适当比例稀释后提取对样本进行稀释是为了保证检测的准确性,使样本的检测值在标准曲线线性范围内,稀释倍数通常不超过100倍)

1.2 待测样本为干粉,可用超纯水将样本稀释10~100 mg/mL后使用。

1.3 待测样本为复杂背景基质,可根据需要进行加标回收实验,以确定合适的样本稀释倍数。

2. 100 μL样本装于1.5 mL离心管中,加入100 μL裂解液10 μL蛋白酶K涡旋混匀10 sec后短暂离心

【注】:样本蛋白浓度0~100 mg/mL,蛋白酶K用量为10 μL样本蛋白浓度100~200 mg/mL,蛋白酶K用量为20 μL

3. 将离心管置于60℃孵育30 min75℃孵育15 min,得到预处理样本,待用

4. 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂

位置

试剂名称

用量/

1/7

预处理样本

200 µL

结合液

400 µL

糖原

µL

Poly A钾盐

6 µL

2/8

洗涤液A*

700 µL

3/9

磁珠悬浮液

2µL

洗涤液B*

700 µL

6/12

洗脱液

100 µL

【注】:

  1. 磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀,在一次性加样4~5次后,建议再次混匀后再行加样。

  2. 不同品牌和型号的仪器,试剂加入方式可能会有差别本公司技术人员。

5. 上述96板正确安放置核酸提取仪器中,并放置八联磁棒套

6. 运行如下程序,程序结束后,将洗脱板转移至新的离心管中,溶液可置于-20℃短期保存,-80℃长期保存。

32通道核酸提取仪器的提取程序

步骤

孔位

混合

时间(min)

吸磁

时间(sec)

等待

时间(min)

容积(μL)

混合速度(1~10)

温度(℃)

混合位置(0~100%)

混合幅度(1~100%)

吸磁位置(0~100%)

吸磁速度(1~10)

移磁珠

3

0.2

40

0

700

5

/

0

80

0

1

结合

1

12

80

0

600

5

/

0

80

0

1

清洗1

2

2

30

0

700

8

/

0

80

0

1

清洗2

3

1.5

30

4

700

8

/

0

80

0

1

洗脱

6

8

80

0

100

8

65

0

80

0

1

弃磁珠

3

0.2

0

0

700

5

/

0

80

0

1

【注】:

  1. 设置程序时,选项一栏中选择9段磁吸升温动作同步

  2. 上述提取程序为推荐程序,用户可根据仪器品牌型号及自身需求进行相应调整,详情可咨询本公司技术人员。


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