18464ESMolPure® Magnetic Residual DNA Sample Prepara
Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
线粒体红色荧光探针
¥425D-盐(D-Luciferin Potassium Salt)
面议MycAway支原体去除试剂(1000×)
面议TUNEL细胞凋亡检测试剂(tunel试剂盒)
面议TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
面议Human Fibronectin 人纤维连接蛋白
面议Collagenase IV胶原酶IV型
面议D- 盐(D-Luciferin, Sodium Salt)
¥748FITC标记鬼笔环肽(FITC Phalloidin)
¥785TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽
¥785支原体喷雾剂(即用型)
面议Polybrene 聚凝胺(10 mg/mL)
面议MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用的磁珠和精心优化的缓冲体系,可最大限度的分离纯化样本中的微量宿主细胞残留DNA。
该前处理试剂盒可与本公司的多种宿主细胞DNA残留(qPCR法)检测试剂盒配合使用,包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41301ES)、HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41302ES/41306ES)、Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41303ES)和E.coli残留DNA检测试剂盒(Cat#41304ES/41308ES)、SV40LTA&E1A残留DNA检测试剂盒(Cat#41310ES)和复制型慢病毒(RCL)检测试剂盒(Cat#41311ES)等。
产品组分
类别 | 组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
18464ES25 (25T) | 18464ES60 (100T) | |||
Part I | 18464-A | 蛋白酶K(20 mg/mL) | 0.5 mL/支×1支 | 1 mL/支×2支 |
Part Ⅱ | 18464-B | 磁珠悬浮液 | 0.5 mL/支×1支 | 1 mL/支×2支 |
18464-C | 裂解液 | 2.5 mL/瓶×1瓶 | 10 mL/瓶×1瓶 | |
18464-D | 结合液 | 10 mL/瓶×1瓶 | 40 mL/瓶×1瓶 | |
18464-E | 洗涤液A* | 8 mL/瓶×1瓶(需加12 mL乙醇) | 32 mL/瓶×1瓶(需加48 mL乙醇) | |
18464-F | 洗涤液B* | 4 mL/瓶×1瓶(需加16 mL乙醇) | 16 mL/瓶×1瓶(需加64 mL乙醇) | |
18464-G | 洗脱液 | 2.5 mL/瓶×1瓶 | 10 mL/瓶×1瓶 | |
Part Ⅲ | 18464-H | 糖原 | 225 uL/支×1支 | 900 uL/支×1支 |
18464-I | Poly A钾盐 | 150 uL/支×1支 | 600 uL/支×1支 |
运输和保存方法
1.Part I组分冰袋运输,4℃可保存1年,长期保存于-20℃。
2.Part II组分室温运输,室温保存,有效期1年。
3.Part Ⅲ组分干冰运输,-20℃保存1年。
4. 收到货后,请检查Part I、Part II和Part Ⅲ共3个组分是否齐全,并立即放入对应的保存温度中储存。
注意事项
1. 使用前请详细阅读使用说明书,严格按照使用说明书操作,样本处理建议在超净台或生物安全柜中进行。
2. 注意观察常温保存溶液是否有析出或浑浊(尤其冬季室温为低温环境时),可37℃水浴至溶液澄清,避免影响使用效果。
3. 洗脱时可能存在磁珠残留,吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。
4. 处理样本及加样时,勤换枪头,避免交叉污染。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
6. 本产品仅作科研用途。
实验前准备
1. 自备设备:漩涡振荡器、水浴锅或金属浴、离心机、磁性分离架、杭州奥盛Auto-Pure32A自动化核酸提取仪或其他品牌全自动化核酸提取仪。
2. 自备耗材:10μL-1000μL不等的低吸附带滤芯枪头、1.5 mL低吸附离心管、PCR 8连管或96孔板及相应的管盖或覆膜。
3. 自备试剂:无水乙醇(分析纯)、1×PBS缓冲液(pH 7.4,无Mg2+和Ca2+)、超纯水。
【注】:推荐您购买本公司的超纯水(Cat#10116ES)。
4. 使用时,需在洗涤液A*和洗涤液B*瓶中加入标签或说明书中注明体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。
每次使用后将瓶盖盖紧,以保持瓶中的乙醇含量。
一、手工提取操作方法
1. 样本处理
1.1 待测样本为疫苗等本身含有较高的核酸含量的样本,可用1×PBS(pH 7.4,无Mg2+和Ca2+)对样本进行适当比例稀释后提取(对样本进行稀释是为了保证检测的准确性,使样本的检测值在标准曲线线性范围内,稀释倍数通常不超过100倍)。
1.2 待测样本为干粉时,可用超纯水将样本稀释至10~100 mg/mL后使用。
1.3 待测样本为复杂背景基质时,可根据需要进行加标回收实验,以确定合适的样本稀释倍数。
2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中,加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K,涡旋混匀10 sec后短暂离心。
【注】:样本蛋白浓度0~100 mg/mL,蛋白酶K用量为10 μL;样本蛋白浓度100~200 mg/mL,蛋白酶K用量为20 μL。
3. 将离心管置于60℃孵育30 min,75℃孵育15min。
【注】:若金属浴升温较快,可在同一个金属浴上孵育;若升温慢,则需提前准备2个金属浴,并将温度分别调至60℃和75℃。
4. 孵育完成后,加入400 μL结合液、9 μL糖原和6 μL Poly A钾盐涡旋混匀。
5. 加入20 μL磁珠悬浮液,涡旋混匀后,放置10 min,每隔2 min涡旋混匀10 sec。
【注】:磁珠使用前需涡旋混匀,保证磁珠重悬。在一次性加样4~5次后,建议再次混匀后再行加样。
6. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1~2 min,待磁珠吸附,小心吸弃液体。
7. 加入700 μL洗涤液A(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),涡旋混匀1 min,确保磁珠分散,离心管壁无聚集磁珠。
8. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1~2 min,待磁珠吸附,小心吸弃液体。
9. 加入700 μL洗涤液B(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),涡旋混匀1 min,确保磁珠分散,离心管壁无聚集磁珠。
10. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1~2 min,待磁珠吸附,小心吸取弃体。
11. 为保证尽量吸出残留液体,可将离心管快速离心10 sec后,置于磁力架上用10 μL移液器吸出残留液体。
12. 打开管盖,室温或37℃放置5~10 min,直至乙醇挥发,磁珠表面无反光至刚出现龟裂即可,不可过度干燥。
13. 将离心管从磁力架上取下,加入100 μL 65℃预热的洗脱液,振荡混匀后短暂离心,65℃孵育5 min,期间振荡混匀1次。
14. 短暂离心后,将离心管放置于磁力架上静置约2 min,待磁珠吸附后,小心将DNA溶液转移至新的离心管中,保存于-20℃,长期保存需放置于-80℃。
二、半自动化提取操作方法
配套本公司自动化仪器使用,以32通道核酸提取仪为例。不同品牌和型号的仪器,试剂加入方式可能会有差别,本公司技术人员。
1.样本处理
1.1 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本,可用1×PBS(pH 7.4,无Mg2+和Ca2+)对样本进行适当比例稀释后提取(对样本进行稀释是为了保证检测的准确性,使样本的检测值在标准曲线线性范围内,稀释倍数通常不超过100倍)。
1.2 待测样本为干粉时,可用超纯水将样本稀释至10~100 mg/mL后使用。
1.3 待测样本为复杂背景基质时,可根据需要进行加标回收实验,以确定合适的样本稀释倍数。
2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中,加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K,涡旋混匀10 sec后短暂离心。
【注】:样本蛋白浓度0~100 mg/mL,蛋白酶K用量为10 μL;样本蛋白浓度100~200 mg/mL,蛋白酶K用量为20 μL。
3. 将离心管置于60℃孵育30 min,75℃孵育15 min,得到预处理样本,待用。
4. 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂:
位置 | 试剂名称 | 用量/孔 |
第1/7列 | 预处理样本 | 200 µL |
结合液 | 400 µL | |
糖原 | 9 µL | |
Poly A钾盐 | 6 µL | |
第2/8列 | 洗涤液A* | 700 µL |
第3/9列 | 磁珠悬浮液 | 20 µL |
洗涤液B* | 700 µL | |
第6/12列 | 洗脱液 | 100 µL |
【注】:
磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀,在一次性加样4~5次后,建议再次混匀后再行加样。
不同品牌和型号的仪器,试剂加入方式可能会有差别本公司技术人员。
5. 将上述96孔板正确安放置核酸提取仪器中,并放置八联磁棒套。
6. 运行如下程序,程序结束后,将洗脱板转移至新的离心管中,溶液可置于-20℃短期保存,-80℃长期保存。
32通道核酸提取仪器的提取程序
步骤 | 孔位 | 混合 时间(min) | 吸磁 时间(sec) | 等待 时间(min) | 容积(μL) | 混合速度(1~10) | 温度(℃) | 混合位置(0~100%) | 混合幅度(1~100%) | 吸磁位置(0~100%) | 吸磁速度(1~10) |
移磁珠 | 3 | 0.2 | 40 | 0 | 700 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
结合 | 1 | 12 | 80 | 0 | 600 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
清洗1 | 2 | 2 | 30 | 0 | 700 | 8 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
清洗2 | 3 | 1.5 | 30 | 4 | 700 | 8 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
洗脱 | 6 | 8 | 80 | 0 | 100 | 8 | 65 | 0 | 80 | 0 | 1 |
弃磁珠 | 3 | 0.2 | 0 | 0 | 700 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
【注】:
设置程序时,在“选项”一栏中选择“分9段磁吸”和“升温动作同步”。
上述提取程序为推荐程序,用户可根据仪器品牌型号及自身需求进行相应调整,详情可咨询本公司技术人员。