Vero细胞残留DNA检测试剂盒

41303ES60Vero细胞残留DNA检测试剂盒

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-07-07 15:35:58
438
属性:
供货周期:现货;规格:100T;货号:41303ES60;应用领域:医疗卫生,生物产业,制药;主要用途:用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中的Vero残留DNA含量的试;
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产品属性
供货周期
现货
规格
100T
货号
41303ES60
应用领域
医疗卫生,生物产业,制药
主要用途
用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中的Vero残留DNA含量的试
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

Vero细胞残留DNA检测试剂盒是用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中的Vero宿主细胞DNA残留片段含量的试剂盒。

详细介绍

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit

Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒

41303ES50

41303ES60

50T

100T

8895.00

16425.00

产品描述

Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒是用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中的Vero宿主细胞DNA残留片段含量的试剂盒。

本试剂盒采用PCR荧光探针原理,专一快速的检测Vero细胞的残留DNA,其检测限可以达到fg平。试剂盒配套有Vero DNA Control(DNA定量参考品)。本试剂盒需要与磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(Cat#18461/18462)配套使用。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

41303ES50(50T)

41303ES60(100T)

41303-A

Vero qPCR mix

0.8 mL

1.6 mL

41303-B

Vero Primer&probe mix

200 μL

400 μL

41303-C

DNA Dilution Buffer

2×2 mL

4×2 mL

41303-D

Vero DNA Control(30 ng/μL)

25 μL

50 μL

【注】:适用机型(包含但不限于以下仪器):

Bio-Rad:CFX96 Optic ModμLe;

Thermo Scientific:ABI 7500;ABI QuantStudio 5;ABI StepOnePlus;

上海宏石医疗科技:SLAN-96S.

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃储存,有效期2年。收到货后,建议将D组分Vero DNA Control储存于-80℃,其它组分储存于-20℃。

注意事项

1. 加样和配液步骤尽量都在冰上操作。

2. 每个组分在使用前都应充分震荡混匀,低速离心。

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途。

使用方法

一、Vero DNA Control的稀释和标准曲线的制备

用试剂盒中提供的DNA Dilution Buffer将Vero DNA Control进行梯度稀释,稀释浓度依次为 300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL、3 fg/μL

具体操作如下

1. 将试剂盒中的Vero DNA Control和 DNA Dilution Buffer置于冰上融化,待*融化后,轻微振荡混匀,低速离心10 sec。

2. 取7支干净的1.5 mL离心管,分别标记为 3 ng/μL,①,②,③,④,⑤,⑥。

3. 在标记为3 ng/μL的1.5 mL离心管中加90 μL DNA Dilution Buffer和10 μL Vero DNA Control,即稀释为 3 ng/μL,振荡混匀后短时间快速离心10 sec,该浓度可分装置于-80℃短期保存(不超过3个月),使用时避免反复冻融。

4. 在①,②,③,④,⑤,⑥ 管中先分别加入90 μL DNA Dilution Buffer,再进行梯度稀释,稀释方法如下:

稀释管

稀释比例

终浓度

10 μL 3 ng/μL+90 μL DNA Dilution Buffer

300 pg/μL

10 μL ①+90 μL DNA Dilution Buffer

30 pg/μL

10 μL ②+90 μL DNA Dilution Buffer

3 pg/μL

10 μL ③+90 μL DNA Dilution Buffer

300 fg/μL

10 μL ④+90 μL DNA Dilution Buffer

30 fg/μL

10 μL ⑤+90 μL DNA Dilution Buffer

3 fg/μL

【注】:1. 每个浓度做3个复孔。该试剂可测试3 fg/μL-3 ng/μL线性范围,如需要,可扩大或缩小线性范围。

          2. 为减少反复冻融次数和避免污染,建议初次使用时将DNA定量参考品分装储存于-80℃。

3. 已融化未使用的DNA Dilution Buffer可保存于2-8℃ 7天,如长时间不用请放置于-20℃。

4. 为确保模板*混匀,每个梯度稀释时需震荡混匀1 min以上。

二、加样回收质控QC的制备

根据需要设QC中的Vero DNA加样浓度(以制备加3 pg/μL DNA量的样本QC为例),具体操作如下:

100 μL待测样本加入1.5 mL干净的离心管中,再加入10 μL②,混匀,标记为加样回收QC。

加样回收QC和同批待测样本一起进行样本前处理,制备加样回收QC纯化液。

三、标准品回收质控QC的制备(可选)

根据需要设QC中的Vero DNA标准品浓度(以加3 pg/μL DNA 标准品为例),具体操作如下:

100 μL 3 pg/μL定量参考品的稀释液加入1.5 mL干净的离心管中,标记为标准品回收QC。

标准品QC和同批待测样本一起进行样本前处理,制备标准品QC纯化液。

四、阴性质控NC的制备

根据实验设置阴性质控,具体操作如下:

100 μL样本基质溶液(或DNA Dilution Buffer)加入1.5 mL干净的离心管中,标记为阴性质控NC。

阴性质控NC和同批待测样本一起进行样本前处理,制备成阴性质控NC纯化液。

五、反应体系

组分

体积(μL)

Vero qPCR mix

16

Vero Primer&probe mix

4

DNA template

20

总体积

40

【注】:1. 根据反应孔数计算本次所需的 qPCR MIX 总量:qPCR MIX =(反应孔数+2)×40 μL(含有2孔的损失量)。实验中每一个样品模板最好重复做3个以上。

2. 加样完成密封好管子后,请先低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底,再震荡混匀5 sec以上,*混匀反应液,再低速离心10 sec将管壁的液体离心收集至管底,如有气泡,需将气泡排尽。

下图为参考板位

image.png

该示例表示的是检测6个浓度梯度的DNA标准曲线、1个无模板对照NTC、3个阴性质控NC、3个待测样本、3个加样回收QC和3个标准品回收QC。每个检测做3个重复孔。

六、扩增程序参数设置(两步法)(以ABI公司7500 qPCR仪、软件版本2.0为例)

创建空白新程序,选择绝对定量检测模板。

创建1个检测探针,命名为Vero-DNA,选择报告荧光基团为FAM,猝灭荧光基团为none。

Assign target (s) to the selected wells面板中,将标准曲线孔的Task一栏设置为Standard,并且在Quantity 一栏分别赋值为300000、30000、3000、300、30、3(含义为每孔的DNA浓度,单位为fg/μL),并且在相应的sample name一栏中命名为300 pg/μL,30 pg/μL,3 pg/μL,300 fg/μL,30 fg/μL,3 fg/μL;将无模板对照NTC孔的Task一栏设置为NTC;将阴性质控NC孔、待测样本孔、样本QC孔的Task一栏设置为Unknown,并且在相应的Sample Name一栏中命名为NTC、NC、YP、QC,之后点击 。

4. 扩增程序设置:设置反应体积40 μL。

循环步骤

温度(℃)

时间

循环数

预变性

95℃

10 min

1

变性

95℃

15 sec

40

退火/延伸(收集荧光)

60℃

30 sec

七、qPCR 结果分析

Analysis的Amplification Plot面板中,系统会自动给出Threshold,有时系统给出的Threshold离基线太近,导致复孔之间Ct相差甚远,可手动调节Threshold至合适位置,点击Analyze。此时可在Multicomponent Plot初步查看扩增曲线的形态是否正常。

2. 在Analysis的Standard Curve面板中,可读取标准曲线的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R²、扩增效率(Eff%)。正常的标曲,R²>0.99;90%≤Eff%≤110%。

3. 在Analysis的View well table面板中,Quantity一栏可读取无模板对照NTC、阴性质控NCS、待测样本、样本ERC的检测值,单位为fg/μL,后续可在检测报告中将单位换算成pg/μL或pg/mL。

HB220322



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