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上海市所在地
产品名称 | 规格 | 货号 |
苯胺4羟化酶(AH)生化检测试剂盒 | 100管/48样 50管/24样 | EY-01S1264 |
测定意义:
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。AH在P450酶系中相当于CYP2E1亚型,CYP2E1不仅参与了药物的代谢,而且还能催化多种前致癌物和前毒物的活化过程。
测定原理:
AH催化苯胺羟化后产生的4-氨基酚,进一步转变为酚-吲哚复合物,在630nm处有特征吸收峰;通过测定630nm吸光度增加速率,来计算AH活性。
自备仪器及用品:
普通离心机、超速离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、双蒸水和冰。
试剂一:液体×1瓶,室温保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存。临用前加入22mL试剂二,现配现用。
试剂四:液体×1支,4℃保存。
1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。
3、血清等液体:直接测定。
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(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T
=1608×△÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/g鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T
=1608×△A÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷细胞数量
(4)按液体体积计算