转基因大豆MON87705品系试剂盒(荧光-PCR法)

转基因大豆MON87705品系试剂盒(荧光-PCR法)

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2024-08-26 09:48:51
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属性:
供货周期:现货;规格:50T;货号:HXG740;应用领域:生物产业;主要用途:科研使用;
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产品属性
供货周期
现货
规格
50T
货号
HXG740
应用领域
生物产业
主要用途
科研使用
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上海沪峥生物科技有限公司

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产品简介

转基因大豆MON87705品系试剂盒(荧光-PCR法)产品特点:1、灵敏度高,抗污染能力强,定量准确,重复性好;2、样本处理与PCR扩增在同一个PCR反应管中即可完成;3、无需加热
产品说明:1.高便捷性。 2.灵敏度高。 3.特异性强。 4.精密性好。 5.结果准确可靠。 6.严格的质量标准。
结构及组成:聚合酶链式反应液(PCR反应液)、RNA

详细介绍

       转基因大豆MON87705品系试剂盒(荧光-PCR法)

产品名称】

通用名称:转基因大豆 MON87705 品系核酸检测试剂盒 (荧光-PCR 法)

Name :Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PCR Method)

【包装规格】50T/盒

本试剂盒适用于检测转基因植物的 MON87705 基因,用于筛查待检测植物中是否含有 MON87705 成分。其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用国家标准的 MON87705 特异性引物和探针,用荧光 PCR 技术进行转基因成分的检测。

【试剂组成】

酶液

50μL×1 管

MON87705 反应液

500μL×2 管

MON87705 阳性质控品

50μL ×1 管

阴性质控品

250μL ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃避光保存、运输、避免反复冻融,反复冻融次数不超过 5 次。有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】称取 200g 样品。【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 0℃

转基因大豆MON87705品系试剂盒(荧光-PCR法)使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

固体样本:用粉碎机或冷冻研磨仪将样品研磨至细粉状。

1.2 DNA 提取

对于固体标本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推荐的方法:

1) 每个样品取 2 个平行管。称取 200mg 粉碎的样品,加入 1mL 预冷至 4℃的抽提液,剧烈摇动混匀后,在冰上静止 5min,4℃条件下 10000g 离心 15min,弃上清液;

2) 加入 600μL 预热至 65℃的裂解液,充分重悬沉淀,在 65℃恒温保持 40min, 期间颠倒混匀 5 次;

3) 室温条件下10000g 离心10min,取上清液转移至新离心管中,加入5μLRNAseA 37℃恒温 30min,分别用等体积苯酚:异戊醇溶液:异戊醇溶液各抽提一次;

4) 室温条件下,10000g 离心 10min,取上清液至新离心管,加入三分之二体积的异丙醇,十分之一体积的 3mol/L 的乙酸钠溶液(pH=6.5-20℃放置 2-3h

5)  4℃条件下,10000g 离心 15min,弃上清液,用 70%乙醇洗涤沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即为样品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取试剂盒。

油脂样本请直接选用市售油脂 DNA 提取试剂盒,按说明操作。

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

MON87705 反应液

酶液

用量

20μL

1μL

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

1.1 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;荧光通道选择: 检测通道

Reporter Dye)FAM 淬灭通道Quencher Dye)选择 NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。

1.2 推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

转基因大豆MON87705品系试剂盒(荧光-PCR法) 结果分析判定

结果分析条件设定

设置 Baseline  Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline  start (一般可在 3~15 范围内调节)、stop (一般可在 5~20 范围内调节),以及Threshold  Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

 结果判断

阳性:检测通道 Ct ≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35<Ct ≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35<Ct ≤ 38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

3. 质控标准

阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。




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