【检验原理】本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，设计一对马源性成分(Horse)保守区特异性引物结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对马源性成分(Horse)保守区的DNA进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

转基因水稻LLRICE62试剂盒(荧光-PCR法)【试剂组成】

注：

1） 不同批号试剂不能混用。

2） 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次。有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycle、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g。

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2-8℃冰袋运输

1. 样品处理（样本处理区）

取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g，剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2 核酸提取

1.3 提取采用提取或试剂（磁珠法或离心柱法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

5. 结果分析判定

• 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2 判断

a) 检测通道 Ct 值≤35，有 FAM 荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，判断样品为阳性。

b) 当 30<Ct 值≤35 时，且有典型的扩增曲线时，则需重复实验。再次扩增后检测体系的Ct 值仍≤35，且有典型的扩增曲线，则判定该样品含有相应的动物源性成分。当再次扩增后，检测体系 Ct 值＞35，或无典型的扩增曲线，则判定该样品不含相应的动物源性成分。

6. 质控标准

a) 空白对照：无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35，未出现典型的扩增曲线。

b) 阴性对照：无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35，未出现典型的扩增曲线。

c) 阳性对照：有 FAM 荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，Ct 值＜30。

d) 以上应同时满足，否则本次实验无效。

转基因水稻LLRICE62试剂盒(荧光-PCR法)【注意事项】

Ø 所有操作严格按照说明书进行；检验过程中，参照《GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测》的规定进行。

Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；

Ø 反应液应避光保存；

Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区工作服；

Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全   通则》进行处理。

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沪峥PCR优势：

   1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保
所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测。

   2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证。

   3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。

   4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。

P CR实验概述