CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针

产品描述

CFDA-SE分子式为C₂₉H₁₉NO₁₁，分子量为557.47，CAS号为150347-59-4，CFDA SE英文名是Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，CFDA-SE可用于细胞示踪，也可用于细胞增殖检测。CFDA SE可以通过完好的细胞膜，进入细胞后被细胞内的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以随机地(spontaneously)、不可逆地和细胞内蛋白的赖氨酸残基（Lysine）或其它氨基发生结合反应，并标记这些蛋白。在加入荧光探针CFDA SE后大约24小时，即可充分标记细胞。被CFDA SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，标记时间可达数个月。

CFDA, SE标记细胞呈绿色荧光，检测时的激发波长可以选择488nm激发，发射波长为518nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 检测通道。除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。

CFDA-SE标记的分裂细胞每分裂一次，子代细胞的荧光会减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞荧光强度减半(1/2)，分离两次的细胞荧光强度再减半(1/4)，以此类推，荧光强度按照1/2，1/4，1/8，1/16的规律逐渐递减。采用CFDA SE通过流式细胞仪检测获得的检测结果每一个峰代表一种分裂次数的细胞，从右至左的峰通常依次为分裂0次、1次、2次、3次等次数的细胞。分裂次数较多后，分裂0次或1次等没有分裂或分裂次数较少的细胞会逐渐减少直至检测不到。CFSA，SE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFDA, SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴细胞的增殖检测，也可用于成纤维细胞，自然杀伤细胞，造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。CFDA SE如果和其它荧光探针联用，可以获取不同分裂次数细胞的其它相关信息。我们的CFDA SE探针产品以25mg粉末包装的形式提供。

运输与保存方法

常温运输，-20℃干燥避光保存，保质期24个月。避免反复多次冻融。

使用方法

1.保存液配制（5mM）

按需配制，如取DMSO 360μL，溶解1mg CFSE，超音波溶解，得到5mM CFSE保存液；将其按40μL体积分装于避光的无菌冻存管中，-20℃可保存2个月。

注意：CFSE遇水容易分解，所以在配置时候要用无水DMSO，配置后计算用量尽快使用，多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有机溶剂，对于蛋白质会有损伤，所以在配置的时候DMSO用量越少越好；

2. 工作液配制

取5mM的CFSE稀释液1 ul，加入1ml 10％FCS 的PBS稀释。

3.染色

a.重悬细胞。用有5％FCS的PBS重悬细胞，细胞浓度一般为1x1x10⁶/ml （体外实验）或1x1x10⁷/ml（转染实验）。

b.染色。1ml DFSE工作液与1ml细胞悬液混合后37℃孵育5－10分钟。期间轻轻混匀两次（用手轻弹管壁，切忌吹打）。

c.终止染色。用*培养液洗涤3次并离心。一般在第2次洗涤后再孵育5分钟后进行第3次洗涤。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640（先加入1ml混匀 ，然后续加入7ml）, 轻轻混匀1min（用手轻弹，切忌吹打）,1 500 r/ min 离心5 min。

d.流式细胞仪在FL1通道检测。