EZ Trans慢病毒包装试剂盒

产品描述

和元李记EZ Trans慢病毒包装试剂盒（EZ Trans Lentiviral Packaging Kit）包含:慢病毒包装质粒、对照质粒、转染试剂（EZ Trans Regent）等三个组份。和元李记慢病毒包装试剂盒，提供足量、优质的对照质粒和包装质粒，省去实验人员抽提质粒的工作。

和元李记慢病毒载体表达系统由pLenti慢病毒载体和Lentiviral Mix质粒组成。pLenti慢载体中含有HIV基本元件5’LTR和3’LTR以及WPRE等其他辅助元件，表达框为U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro，含绿色荧光和puro真核抗性。客户可以根据不同的实验目的针对plenti载体改造用于启动子、基因功能功能研究，稳定株筛选等。Lentiviral Mix能够表达病毒包装需要的各种必需原件，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包装系统。

订购信息

产品组分

运输与保存

蓝冰运输。A、B组分-20℃保存，C组分4℃保存，有效期12个月。

使用方法

以10 cm培养皿为例（1皿为1T）

1.        细胞准备：293T细胞按照6×10⁵cells/mL的细胞密度传代到10cm培养皿中，第二天细胞长到80%-85%时准备转染。

2.        转染前换液：转染前1h将需要转染的细胞更换新鲜的DMEM，10mL/皿。

3.        转染：

1)        取1.5mL EP管记为质粒混合液(管A)，加入500uL DMEM，16μg质粒DNA（可自行改造）和22μg包装质粒，振荡混匀；

2)        另取1.5mL EP管记为转染试剂混合液（管B），加入500uL DMEM，90μL 转染试剂，振荡混匀。

3)        再将管B缓慢加入到管A中，轻轻混匀，静置8min形成复合物，后将混合液均匀滴加到提前换好液的10cm培养皿中，轻轻混匀，放入培养箱中培养

4.        转染后换液：转染后6-8h,将培养皿中的培养基吸掉，弃于废液杯中，然后加入10mL 培养基（含有血清和抗生素）继续培养。

5.        病毒收集：转染48h后，吸取上清液于50mL 离心管中，4000rpm离心10min, 4℃，将上清液用0.45um过滤器过滤转移到新的50mL 离心管中。此时上清液中的病毒颗粒可以直接去检测滴度或者感染目的细胞，如果对病毒的滴度及纯度有较高要求，可进行后续操作。

6.        病毒浓缩（可选）：每10mL 病毒上清液加入2.5mL EZ慢病毒浓缩液（CAT:AC04L442），混匀，4℃放置2h，4000rpm离心30min，吸弃上清。

7.        病毒分装及保存（可选）：吸取EZ慢病毒冻存液（CAT:AC04L453）1mL重悬上述病毒浓缩沉淀，轻轻混匀后-80℃保存。病毒溶液可分装保存，避免反复冻融。

注意事项

1.      本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.      所有慢病毒操作均应尽量在BSL2*生物安全柜中进行，并佩戴一次性医*口罩和手套。

3.      病毒切忌反复冻融，冻融一次病毒滴度降低10%-20%左右。

4.      病毒储存6个月后，建议在使用前重新测定病毒滴度。

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