产品属性：

名称    CIK细胞
产品概述

CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，CIK增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。

由于该细胞同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子，故又称为NK细胞（自然杀伤细胞）样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，

CIK细胞可以通过多机制抗肿瘤、抗病毒：

1.CIK细胞能以不同的机制识别肿瘤细胞，通过直接的细胞质颗粒穿透封闭的肿瘤细胞膜进行胞吐，释放穿孔素、颗粒酶，实现对肿瘤细胞的裂解；

2.CIK细胞能分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多种炎性细胞因子，对肿瘤也有直接抑制作用；

3.CIK细胞可以通过配体-受体（Fas:FasL）介导的方式诱导肿瘤细胞凋亡，因此CIK尤其适用于FasL阳性肿瘤的治疗；

4.CIK细胞分泌的细胞因子能显著刺激初始型T细胞增殖，有效激活机体的免疫系统，使之趋于正常，提高病人自身抗肿瘤的能力。

目前，肿瘤的发生机制尚未形成普遍接受的理论。研究者普遍认可肿瘤的发生、发展与人体的免疫功能密切相关。即在正常情况下，肿瘤与机体的防御机能之间处于一种动态的平衡，而一旦这种平衡被破坏，就可能发生肿瘤。身体各组织细胞受到外界化学、物理、生物等因素刺激或自身细胞衰老变异等因素的影响，使得体内某些细胞发生突变，成为癌前细胞；而机体免疫功能低下或者由于免疫异常，无法及时识别、杀伤、清除这些异常细胞，突变细胞在组织内复制生长，达到一定数量后破坏器官功能，肿瘤即发生。肿瘤患者，尤其是恶性肿瘤病人往往免疫功能、特别是细胞免疫功能低下，因而疾病呈进展、活动、预后差。因此，提高机体免疫力，建立有效的免疫应答是治疗肿瘤有希望的途径。CIK细胞治疗即将大量杀伤性高、功能强、数量多的免疫活性细胞回输患者体内，直接发挥杀死肿瘤细胞的作用，并通过调节、激活患者的免疫体系，调动、提高患者自身的抗肿瘤能力。

CIK细胞具有以下突出的特点：

1.增殖速度快，杀瘤活性高。CIK细胞可以在体外大量扩增，培养14天可以增殖200倍以上，其效应细胞CD3+CD56+的增殖可达1000倍以上，抗肿瘤活性得以大大增强。

2.杀瘤谱广。CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤是非MHC限制的，对多种肿瘤细胞均有杀灭作用。

3.能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡。CIK细胞虽然在Fas被占据后会引起少量细胞凋亡，但对其杀瘤细胞毒性没有明显影响；反之，CIK细胞可以诱导FasL阳性肿瘤细胞的凋亡。

4.对多重耐药肿瘤细胞同样敏感。CIK细胞对放、敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性。

5.CIK细胞杀瘤活性不受CsA（A）和FK506（普乐可复）等免疫抑制剂的影响。

6.对正常骨髓造血前体细胞毒性小，仅对红系生成产生轻微的抑制，这可能与CIK细胞自身分泌高水平的IFN-γ有关。

7.CIK细胞具有识别肿瘤的机制，特异性强，对正常的细胞无毒性作用。

8.安全性好。CIK细胞是活化的患者自体细胞，应用安全，不会产生排斥等反应，患者副反应小。

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
实验报告：
产品仅用于科研一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
细胞骨架衔接蛋白BIN3抗体

Bcr抗体

磷酸化乳腺癌易感基因1抗体(人)

磷酸化T淋巴细胞受体抗体

B淋巴细胞连接蛋白抗体
人γ干扰素(IFN-γ)抗体elisa分析检测试剂盒

人γ干扰素(IFN-γ)elisa分析检测试剂盒

人γ分泌素激活蛋白(PION)elisa分析检测试剂盒

人γ分泌酶elisa分析检测试剂盒

人γ氨基丁酸(GABA)elisa分析检测试剂盒
CIK细胞小鼠肺炎支原体(MP)抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒

小鼠肺炎支原体(MP)抗体(IgG)elisa检测试剂盒

小鼠分化簇抗原30配体(CD30L)elisa检测试剂盒

小鼠分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)elisa检测试剂盒

小鼠分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)elisa检测试剂盒