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本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！
商品属性：
货号 | GOY-SH110 | 检测方法 | 微量法 |
规格 | 100管/96样 | 产品类别 | 脂肪酸代谢系列 |
测定意义：
ACL(EC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的关键酶,其催化产生的乙酰辅酶 可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基
测定原理:
ACL 在 ATP 和辅酶 存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶 、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步
NADH 生成苹果酸和 NAD+,在 340nm 测定 NADH 减少速率,计算 ACL活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 2μL×1 支,4℃保存;
样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~10
议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。
10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)工作液的配置,将试剂二和试剂三转移至试剂一中,充分混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min;(
剂一至试剂二和试剂三中,充分混匀溶解后转移至试剂一瓶中,重复 2-3 遍);用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融
(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液,混匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。
ACL 活性计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)ACL 活力计算
单位定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=1608×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.216×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体
总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清(浆)ACL 活力计算
单位定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=3216×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=3216×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=6.432×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本
样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500
生化试剂盒的使用注意事项：
选择合适的试剂盒：根据实验目的和检测对象选择合适的试剂盒，确保实验的准确性和可靠性。
严格遵循说明书：按照试剂盒的说明书进行操作，避免误用或浪费。
注意保存条件：按照试剂盒的保存条件进行妥善保存，避免阳光直射、高温或潮湿等不利因素。
控制实验条件：在实验过程中严格控制实验条件，如温度、时间、pH值等，以确保实验结果的稳定性。
公司正在出售的产品：
原果胶含量测试盒 | 莽草酸脱氢酶(SD)测试盒 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)测试盒 | 锰过氧化物酶(MnP)测试盒 |
滤纸酶测试盒 | 木质素过氧化物酶(LiP)测试盒 |
麦芽糖含量测试盒 | 木质素含量测试盒 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)测试盒 | 内切β1，4葡聚糖酶(Cx)测试盒 |
磷脂酶A2(PLA2)测试盒 | 抗狂犬病毒抗体检测试剂盒 anti-RV ELISA Kit |
磷脂酶C(PLC)测试盒 | 人β-防御素2ELISA试剂盒 |
磷脂酶D(PLD)测试盒 | 人β-防御素3ELISA试剂盒 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)测试盒 | 人β干扰素ELISA试剂盒 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)测试盒 | 人β-内啡肽ELISA试剂盒 |
磷脂酶A2(PLA2)测试盒 | 人β内酰胺ELISA试剂盒 |
磷脂酶C(PLC)测试盒 | 人β葡萄糖醛SUAN苷ELISA试剂盒 |
磷脂酶D(PLD)测试盒 | ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒微量法人β羟丁SUANELISA试剂盒 |
硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒 | 人β-微管蛋白ELISA试剂盒 |
硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒 | 人β位淀粉样前体蛋白裂解1ELISA试剂盒 |
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