基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) galdcm met(DE3)

简要说明

B834 是 BL21 菌株的父系菌株。该系列宿主菌是蛋氨酸缺陷型，可以用来高水平，高特异性的使用35S-蛋氨酸和硒代蛋氨酸标记目的蛋白，进行蛋白质晶体结构研究。B834宿主菌也是 lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型菌株。DE3 是溶源性的λDE3, 所以带有T7RNA 聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于 pET 系列载体，及其他T7 启动子系列载体。

操作说明

1、取 100μl 冰上融化的B834（DE3）感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25 分钟。

2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后 37℃，200rpm 复苏60 分钟。

4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-40mM 均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。