X33酵母感受态细胞操作说明：

1、取需转化质粒5µg，酶切，回收；

2、取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的线性质粒1-5µg（体积不高于15µl），酵母促转化剂10µl，100µl冰上融化的感受态细胞，毕赤酵母转化液500µl，轻轻翻转混匀6-8次；

3、30℃水浴30min，每15min轻轻翻转混匀6-8次；

4、每支加入20µl的二甲基亚砜；（用于提高转化效率，也可不做）

5、42℃水浴15min，每7.5min轻轻翻转混匀6-8次；

6、12000rpm瞬时离心弃上清，每支加1ml的YPGPlus（或YPG）于30℃复苏1h；（用于提高转化效率，也可不做）

7、12000rpm瞬时离心弃上清，用100µl 0.9%NaCl重悬，涂板，30℃培养3-7d。

X33酵母感受态细胞注意事项：

1、使用酵母促转化剂前，请把装有酵母促转化剂的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。

2、转化液低温环境下会析出，请于常温下溶解后使用。

3、转化全程要无菌操作。