简要说明

YM4271菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为：trp1，leu2，ura，报告基因为： HIS3。可用于酵母双杂，酵母单杂或异源蛋白表达等试验。YM4271感受态细胞经特殊工艺制作pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

操作说明

1、取需转化质粒5µg，酶切，回收；

2. 取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的线性质粒1-5µg（体积不高于15 µl），酵母促转化剂10µl，100µl冰上融化的KM71感受态细胞，毕赤酵母转化液500µl，轻轻翻转混匀6-8次；

3. 30℃水浴30min，每15min轻轻翻转混匀6-8次；

4. 每支加入20µl的二甲基亚砜；（用于提高转化效率，也可不做）

5. 42℃水浴15min，每7.5min轻轻翻转混匀6-8次；

6. 12000rpm瞬时离心弃上清，每支加1ml的YPGPlus（或YPG）于30℃复苏1h；（用于提高转化效率，也可不做）

7. 12000rpm瞬时离心弃上清，用100µl 0.9%NaCl重悬，涂板，30℃培养3-7d。

注意事项

1、使用酵母促转化剂前，请把装有酵母促转化剂的管子在沸水中 煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。

2.转化液低温环境下会析出，请于常温下溶解后使用。

3.转化全程要无菌操作。