简要说明

BY4742菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C，是实验室的常用菌株，可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入BY4742细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA，可用SD-URA板板进行筛选。BY4742感受态细胞经特殊工艺制作，pYES2质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

操作说明：

1、取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重复一次)，100µl冰上融化的AH109感受态细胞，PEG/LiAc500µl，轻轻翻转混匀6-8次； 

2. 30℃水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次；

3. 每支加入20µl的二甲基亚砜；（用于提高转化效率，可不做）

4. 42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6-8次；

5. 12000rpm瞬时离心弃上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃复苏1h；（用于提高转化效率，可不做）

6. 12000rpm瞬时离心弃上清，用100µl 0.9%NaCl重悬，涂板，30℃培养48-96h。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2. 若使用pYES2质粒表达蛋白，需在培养基中加入2%的半乳糖（筛选培养基中不用加半乳糖；当需要目的蛋白表达时，需加入半乳糖代替葡萄糖作为碳源），以诱导目的基因的表达。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

5. 酵母为真核生物，不易长期保存，随感受态在-80℃保存时间的延长，转化效率会不断下降，建议保存时间不超过90天。

6. BY4742酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

7. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。