人白介素2受体(IL-2R)文献引用Elisa kit适用于以下样本的测试

血清、血浆–组织匀浆–腹水–细胞、培养上清

本试剂盒仅供研究，不用于临床诊断

一、实验原理：
本试剂盒采用竞争法检测样本中人白介素2受体(IL-2R)文献引用Elisa kit的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本，再加入生物素标记的识别抗原，在37℃下孵育30min，两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原，然后加入亲和素-HRP，在37℃下孵育30min，亲和素-HRP与生物素抗原结合，洗涤后结合的HRP催化TMB（四甲基联苯胺）成蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关

二、试剂盒组成：

注：
a、试剂盒中“样品稀释液”为0.05M的PBS，“终止液”为2M的H2SO4，洗涤液为含0.15%吐温-20的PBST，如不够可自行配制。
b、不同公司的缓冲体系存在较大差异，请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。
c、浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出，稍微加温后即会消失，不影响使用。
 

三、试剂盒保存
本试剂盒可以在2-8℃下保存6个月，在-20℃下可以保存更长的时间。酶标板为真空包装，板条可以拆卸，拆开以后如一次不能用完，请放入提供的密封袋中，放入干燥剂，2-8℃保存，在一个月之内仍然有效。试剂不能反复冻融。
四、需要而未提供的试剂和器材
a、37℃恒温箱。
b、标准规格酶标仪。
c、精密移液器及一次性吸头
d、双蒸水或超纯水
e、干净的试管或Eppendof管
f、吸水纸
g、自动洗板机或8道排枪
h、ELISA数据处理软件，推荐使用ELISACalc
i、500ml烧杯的和适当量程的量筒
五、试剂准备
a、使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。
b、本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释，计算时应将结果乘以稀释的倍数（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。
c、洗涤液为25倍浓缩液，使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中，用双蒸水定容到500ml即为工作液。
d、标准品的稀释：先用标准品/样品稀释液浆标准品冻干粉定容到150μl，然后漩涡混匀30秒即为标准品原液(24小时内用完)。取5支干净的Eppendorf管，每管加150μl的标准品稀释液，分别标记上32ng/ml，16ng/ml，8ng/ml，4ng/ml，2ng/ml。取150μl标准品原液加入标记32ng/ml 的管中，混匀后同样取出150μl，加入下一管，以此类推直至后一管。] （见下图）
零孔：直接加标准品/样品稀释液。

原液64ng/ml      32ng/ml     16ng/ml     8ng/ml      4ng/ml      2ng/ml
e、生物素抗原的稀释：低速离心，然后抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中，漩涡混匀15秒，至冻干粉*溶解，然后将所有液体倒入稀释液瓶中，漩涡混匀后即为生物素抗原工作液(一周内用完)。
f、亲和素-HRP的稀释：低速离心，使浓缩液全部沉到管底，将浓缩亲和素-HRP全部转移到稀释液瓶中，漩涡混匀后即为亲和素-HRP工作液(一周内用完)。
六、样本前处理
a、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
b、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
c、血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
d、尿液：用无菌管收集，2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
e、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
f、组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2000-3000转/分，离心 20分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
七、洗板方法
a、手工洗板：先洗去酶标孔中的的液体，在吸水纸上拍干，然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液，轻轻摇晃30秒，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复4-5次。
b、洗板机洗板：洗板机洗板比较便捷，但应操作熟练后使用。
八、详细操作程序
a、使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
b、空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
c、标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
d、样品孔：加入样品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
e、轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
f、将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
g、*次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
h、加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中，轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。
i、第二次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
j、显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
k、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
l、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
m、计算：根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用计算软件进行计算，推荐使用人白介素2受体(IL-2R)文献引用Elisa kitcalc进行计算，拟合模型选用logistic曲线（四参数）。标曲示意图如下：

九，操作总结
准备试剂，样品和标准品 

加入准备好的样品和标准品，生物素抗原，37℃反应30分钟

洗板5次，加入亲和素-HRP，37℃反应30分钟

洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟

加入终止液

10分钟之内读OD值

计算
10、性能参数
a、批内差：CV＜10%
b、批间差：CV＜12%
c、检测限：0.2-60ng/ml
d、保  存：2-8℃
e、规  格：96T/盒
f、有效期：6个月(2-8℃)

11、问题分析

购买人白介素2受体(IL-2R)文献引用Elisa kit声明：1、限于现有条件及科技水平，尚不能对所有原料进行全面分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。
2、终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的待测样本并预留备份，并根据预实验结果调整样本浓度。
3、试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。