亚硝酸还原酶(NiR)微量法

亚硝酸还原酶(NiR)微量法

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2022-03-08 16:42:36
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供货周期:现货;规格:100管/48样;货号:YS-01S6500;应用领域:化工;主要用途:公司产品仅供于科研使用;
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现货
规格
100管/48样
货号
YS-01S6500
应用领域
化工
主要用途
公司产品仅供于科研使用
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上海研生实业有限公司

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产品简介

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详细介绍

商品属性:

产品名称

规格

检测方法

货号

亚硝酸还原酶(NiR)微量法

100管/48样

微量法

YS-01S6500

商品介绍:

公司产品仅用于科研测定意义
硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

测定原理

亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少,即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。

图片1.png

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品:液体×1支(EP管中),2 μmol/mL酚标准液,4℃保存。

粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g离心10min,取上清液待测。

2. 细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血液可直接测定,或者适当稀释后测定。

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测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。

3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸馏水,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A空白管。

4. 标准管:取EP管,加入4μL标准品,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A标准管。

5. 对照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸馏水,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。

6. 测定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。

其中标准管和空白管只需做一管,测定管和对照管每个样均需做。

注意:空白管和标准管只需测定一次。

 


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