​
服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）　KIFC1( Kinesin family member C1) 　1 Kit

羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）　KLF6 　100 ul

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）　KIFC3 　100 ul

过氧化基（peroxyl radical；ROO-）　KLF7 　100 ul

氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）　KIN 　100 ul

氮氧基（nitric Oxide；NO-）　KLF15 　20 ul

次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）　Kindlin 2 　100 ul

过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）　KLF4 　20 ul

烷氧自由基（alcoxyl radical）　KIF19 　100 ul

Alkylperoxyl Radical: ROO.　KLF17 　100 ul

脂质氧化　KIF1C 　100 ul

β氧化　KIF22 　100 ul

核酸氧化　KIF20A 　100 ul

蛋白氧化　KIF1B 　20 ul

细菌氧化应激活性氧（ROS）比色法定量（羟自由基）　KIF26B 　100 ul

超氧化物歧化酶（SOD）活性　KIF2A 　1 Kit
转基因品系油菜46A40染料法qPCR试剂盒Streptomyces│sp.分离基物: 沉积物/表层沉积物提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 生物活性微生物：抗菌活性谱:金黄色葡萄球菌 18 枯草芽孢杆菌 20 大肠埃希氏菌 -- 荧光假单胞菌 -- 白假丝酵母 -- 宛氏拟青霉 28培养基: 1002生长条件: 28℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

堪萨斯分枝杆菌种属: Mycobacterium│Mycobacterium kansasii提供形式: 冻干物安全等级: 3模式菌株: no应用领域: 研究生长条件: 37存储条件: 真空冷冻干燥法

Escherichia│coli提供形式: 冻结物安全等级: 2模式菌株: no应用领域: 作为原核表达系统研究基因表达的对照菌株。培养基: 33生长条件: 37℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；定期移植法

Corynebacterium│glutamicum提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 产谷氨酸。培养基: CM0108生长条件: 30℃存储条件: 真空冷冻干燥法

Agrobacterium│tumefaciens提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0032生长条件: 28-30℃存储条件: 真空冷冻干燥法；矿物油法；定期移植法

Citricoccus│alkalitolerans分离基物: 盐碱土提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: yes应用领域: 模式菌株培养基: CM0027+5%NaCl生长条件: 28C存储条件: 真空冷冻干燥

Sphingobacterium│sp.分离基物: 原料乳提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 可导致乳品蛋白变性培养基: CM0827生长条件: 30℃存储条件: 真空冷冻干燥法

Saccharothrix│sp.分离基物: 兰李茎提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 双功能酶抑制剂培养基: CM0027生长条件: 28C存储条件: 真空冷冻干燥

Candida│tropicalis分离基物: 生物样/尖叶卤蕨根提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 近海酵母培养基: 513生长条件: 28℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法