一、细胞基本属性

组织来源：外周血

种属来源：人

细胞简介：单核细胞是血液中最大的血细胞，是机体防御系统的一个重要组成部分。与其他 血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，并且具有更强的吞噬作用。 它通过吞噬和产生抗体等方式来抵御和消灭入侵的病原微生物。D单核细胞能吞噬 异物产生抗体，  在机体损伤治愈、抗御病原的入侵和对疾病的免疫方面起着重要 的作用。机体发生炎症或其他疾病都可引起单核细胞总数百分比发生变化，  因此 检查单核细胞计数成为辅助诊断的一种重要方法。在机体的防护、免疫和创伤愈 治过程中起协同作用。尽管它们是血液中的一类细胞成分，但它们功能的发挥， 更多地体现在循环管道外的器官组织中。在功能方面它们与这些器官组织中的许 多细胞成分如巨噬细胞、肥大细胞、成纤维细胞等密切相关。

培养基：原代巨噬细胞培养体系

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：半悬浮培养

细胞形态：单核细胞

传代特性：细胞特性确定传代

消化液：0.25%胰dan白酶

培养条件：气相：  空气，95%；CO2 ，5%

二、细胞培养状态

发货时发送细胞电子版照片

三、使用方法

人单核细胞是一种半悬浮培养细胞，细胞形态呈单核细胞，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。

3. 细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。

5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。

4. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

四、注意事项

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。

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