一、细胞基本属性

组织来源：外周血

种属来源：人

细胞简介：B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝的造血细胞岛中 ，此后B淋巴细胞的产生和分 化场所逐渐被骨髓所代替。成熟的B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小 结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。  B细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞 ， 浆细胞可合成和分泌抗体  (免疫球蛋白)  ，主要执行机体的体液免疫。

B细胞在骨髓内分化各阶段的主要变化为免疫球蛋白基因的重排和膜表面标志 的表达。  B细胞在发育分化过程中 ，同样也经历选择作用 ，以除去非功能性基 因重排B细胞和自身反应性B细胞 ，形成周围成熟的B细胞库。  B细胞表面有多 种膜表面分子 ，识别抗原、与免疫细胞和免疫分子相互作用 ，也是分离和鉴  别B细胞的重要依据。  B细胞表面分子主要有白细胞分化抗原、  MHC以及多种 膜表面受体。

培养基：原代B淋巴细胞培养体系

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：悬浮培养

传代特性：根据细胞特性传代

消化液：0.25%胰dan白酶

培养条件：气相：空气 ，95%；  CO2 ，  5%

二、细胞培养状态

发货时发送细胞电子版照片

三、使用方法

人B淋巴细胞是一种悬浮培养细胞，细胞形态呈，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。

3. 细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。

5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。

4. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

四、注意事项

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。

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