实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

产品名称：原代成纤维细胞无血清培养基

产品规格：100ml/500ml

货号：BJ-01X1946

保存温度（℃）：2-8℃/-20℃

运输温度（℃）：2-8℃/-20℃

我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，公司产品仅用于科研由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。

培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

猪囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)联免疫吸附测定试剂盒靛红溴化 GR镉标准溶液100ug/mL，体: 1%硝

猪畸胎瘤衍生生长因子1(TDGF1)联免疫吸附测定试剂盒靛红溴化 光谱纯SP镉标准溶液0.100μg/g，体:K+ 2.2mg/L,Na+ 23mg/L,Ca2+ 39mg/L

猪对氧磷3(PON3)联免疫吸附测定试剂盒 新橙皮苷溴化 99.95% metals basis，无水级，粉末钴标准溶液 1000μg/ml

猪质金属蛋白17(MMP-17)联免疫吸附测定试剂盒新橙皮苷溴化 99.99% metals basis钴标准溶液 500mg/L，溶剂：1%盐

猪色素P450氧化还原(CPR)联免疫吸附测定试剂盒 新橙皮苷溴化 FT-IR grade, ≥99.5%钴标准溶液100?g/ml，体: 1%硝

猪生长分化因子9(GDF9)联免疫吸附测定试剂盒S-8大孔吸附树脂 溴化 99.997% metals basis铯标准溶液 1000μg/ml

猪前列腺性磷(ACP3/PAP)联免疫吸附测定试剂盒头孢哌 溴化 分析标准品，99.94%六价铬标准溶液 六价铬标准溶液 1000μg/ml

猪胆囊收缩素/肠促胰肽B受体(CCKBR)联免疫吸附测定试剂盒 头孢哌 氟化，无水 GR，粉末离子标准溶液1000μg/ml

猪角质转谷氨酰(TGM1)联免疫吸附测定试剂盒3,4-二羟氟化，无水 99.9% metals basis离子标准溶液500mg/L，溶剂：水

猪磷二酯4D(PDE4D)联免疫吸附测定试剂盒3,4-二羟铬 AR离子(Cl-)标准溶液 1000µg/mL，体:水

猪核孔蛋白107kda(NUP107)联免疫吸附测定试剂盒3,4-二羟铬 CP离子(Cl-)标准溶液 100µg/mL，体:水

猪肺表面活性物质相关蛋白C(SPC)联免疫吸附测定试剂盒塞来西布铬 GR铈标准溶液 1000μg/ml

猪性唾液脯氨丰富蛋白2(PRB2)联免疫吸附测定试剂盒 塞来西布铬 PT铈标准溶液 1000μg/ml，体：10%HNO3

猪脑环指蛋白(BFP)联免疫吸附测定试剂盒塞来西布铬 SP色度标准溶液 500度

猪谷氧还蛋白3(GLRX3)联免疫吸附测定试剂盒塞来西布铬 99.99% metals basis化学耗氧量（COD）-铬法标准溶液 1000μg/ml

猪酰肽受体2(FPR2)联免疫吸附测定试剂盒枯名铬 ACS化物标准溶液 1.000 g/L in H2O
原代成纤维细胞无血清培养基钙粘蛋白相关蛋白受体BTR1抗体NADPH氧化1(NOX1)检测试剂盒NOX1

有丝分裂蛋白BUB3抗体M型肌激(CKM)检测试剂盒CKM

p60TRP蛋白抗体MAP激活化蛋白激2(MAPKAPK2)检测试剂盒MAPKAPK2

博莱霉素水解抗体L选择素(L-Selectin/CD62L)检测试剂盒L-Selectin/CD62L

短蛋白聚糖抗体L-乳脱氢A链(LDH-A)检测试剂盒LDH-A

BTB/POZ结构域蛋白3抗体L苯丙氨解氨(PAL)检测试剂盒PAL

巴尔得-别德尔综合征相关蛋白12抗体Klotho(Klotho)检测试剂盒Klotho

性亮氨拉链蛋白BZW1抗体KI-67抗原(MKI67)检测试剂盒MKI67

骨形态发生蛋白受体1B抗体I型胶原蛋白(COL-1)检测试剂盒COL-1