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探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图:
产品名称 | 人科研染料法荧光定量通用RT-PCR试剂盒 |
英文名称 | Human Coronavirus(HCoV) |
编号 | BJP3158 |
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性*,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性的定量方法,已得到全世界的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。定量PCR除可以对样品的初始浓度进行准确定量外,还有其它多种丰富的应用。还包括基因表达调控情况的分析、等位基因的分析等。
荧光定量PCR服务:
人科研染料法荧光定量通用RT-PCR试剂盒简介:实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求:
(01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。
(02)请提供已知的全长基因序列。
(03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
(01)引物(探针)设计与合成。
(02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA。
(03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。
(04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准:
我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。
荧光化学物质:
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:
1. TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
以下产品是公司正在*产品:
头孢孟多锂标准品5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐 BCIP Amresco
头孢孟多酯钠标准品L-Norvaline L-正缬氨酸
头孢地尼相关物质B标准品L-Norvaline L-正缬氨酸
头孢妥仑匹酯标准品L-Norvaline L-正缬氨酸
头孢唑林钠标准品Uracil 尿嘧啶
头孢地尼标准品O-Acetyl-L-serine hydrochloride O-酰-L-丝氨酸盐酸盐
头孢地尼相关物质A标准品O-Acetyl-L-serine hydrochloride O-酰-L-丝氨酸盐酸盐
盐酸头孢吡肟标准品邻菲罗啉 ;1,10-菲罗啉;邻二氮菲
盐酸头孢吡肟系统适应性用标准品Esculin sesquihydrate 七叶苷
头孢克肟标准品D-Glucosamine D-氨基葡萄糖苯海拉明柠檬酸盐标准品L-Lysine-L-aspartate L-赖氨酸-L-天冬氨酸盐
盐酸苯海拉明标准品L-Ornithine L-aspartate salt L-鸟氨酸L-天冬氨酸盐
地芬诺酯盐酸盐标准品N-Acetyl-L-glutamine N-酰-L-谷氨酰胺
盐酸地匹福林标准品D-Phenylalanine D-苯氨酸
双嘧达莫标准品偶氮脒类引发剂V50
地红标准品Chlorhexidine digluconate 氯己定二葡糖酸盐
5'-鸟苷酸二钠标准品N-Acryloxysuccinimide N-烯酰氧基琥珀酰亚胺
肌苷酸二钠标准品D-Valine D-缬氨酸
尿苷酸二钠标准品D-Threonine D-苏氨酸
磷酸吡胺标准品L-Aspartic acid Mg salt L-天门冬氨酸镁