通用原则：
1，一步式探针法qRT-PCR试剂盒先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。
2， 扩增子的长度应不超过400bp，理想的能在100－150bp内，扩增片断约短，有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之间，GC富含区容易产生非特异反应，从而会导致扩增效率的降低，及在SG分析中非特异信号。
4， 为了保证效率和重复性，应避免重复的核苷酸序列，尤其是G（不能有4个连续的G）
5， 将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。
b），探针设计指导
1，在设计引物之前设计探针
2，探针的Tm值应在68－70℃之间，如果是目测探针，则要仔细审查GC富含区。
3，探针的5’端要避免有鸟氨酸，5’G会有淬灭作用，即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在
4，选择C多于G的链作探针，G的含量多于C会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针。
6， 探针应尽可能的短，不要超过30个bp。
7， 检测探针的DNA折叠和二级结构。

产品特点：

    全新的热启动DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶，可在PCR反应的过程中抑制非特异扩增，从而最大限度地减少非特异性扩增产物的产生，提高荧光定量PCR反应的特异性；
    采用新型的荧光染料EvaGreen，与传统荧光染料相比，对PCR反应抑制更小，而且荧光信号更强，检测灵敏度更高；
    含有UNG的试剂盒可以防止PCR产物污染体系，进而有效防止实验过程中PCR产物的交叉污染；
TaqMan荧光定量PCR试剂盒提供了除引物、探针、模板外的所有实验所需组分，并配备2×Buffer，可完成不同类型荧光探针的实时荧光定量PCR反应，方便用户使用；
    试剂盒的通用性强，可适用于Roche的Light Cycler、ABI各型实时荧光定量PCR仪和。

服务流程:
1.客户认真写好订单，提供待检基因相关信息；
2.签订技术服务合同，支付预付款（30-50%)；
3.设计合成定量PCR引物（或客户提供文献引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录；
5.PCR预实验，主要检测引物的特异性和扩增效率；
6.正式定量实验：对所有样品上机检测；
7.实验结果和数据分析，形成报告。
原理:
所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图
2.TaqMan探针法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成*同步。

以下是公司*产品：
 

β-环糊精标准品5-FAM    5-Carboxyfluorescein 5-羧基荧光素

γ-环糊精标准品5-FAM [5-Carboxyfluorescein] *Single isomer*  5-羧基荧光素（单一化合物）

环己醇标准品5-FAM [5-Carboxyfluorescein] *Single isomer*  5-羧基荧光素（单一化合物）

环硅油 4标准品5-FAM [5-Carboxyfluorescein] *Single isomer*  5-羧基荧光素（单一化合物）

环硅油 5标准品Triphenylmethyl chloride 三苯基氯烷

环硅油 6标准品rac-GR24独角金内酯

盐酸环喷托酯标准品rac-GR24独角金内酯

环磷酰胺相关物质A标准品rac-GR24独角金内酯

环磷酰胺相关物质B标准品Thymolblue  百里香酚蓝

环磷酰胺相关物质C标准品Thymolblue  百里香酚蓝

黄酮哌酯相关物质C标准品糖原  BR，河蚌提取99%

醋酸氟卡尼标准品糖原  BR，河蚌提取99%

氟卡尼相关物质A标准品糖原  BR，河蚌提取99%

5-氟-2’-脱氧脲核苷标准品糖原Ⅱ  BR，牡蛎提取

氟康唑标准品糖原Ⅱ  BR，牡蛎提取

氟康唑相关物质A标准品糖原Ⅲ  BR，兔肝提取

氟康唑相关物质B标准品糖原Ⅸ  BR，牛肝提取

氟康唑相关物质C标准品Inulin from dahlia tubers 菊糖

5-氟胞嘧啶标准品Inulin from dahlia tubers 菊糖

磷酸氟达拉滨标准品Amylose 直链淀粉 （来源马铃薯）