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Aobious  ELISA Kit FOR 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1

猫号： E0269h

范围：0.156-10 ng/mL

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摩尔浓度计算车®

如何订购

$685.00

每 96 吨685.00美元

数量：

1.00

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更多信息

有可能的使用

该免疫测定试剂盒可用于体外定量测定人 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1、血清、血浆、尿液、组织匀浆和细胞培养上清液和其他生物液体中的浓度。

测试原理

该试剂盒中提供的微量滴定板已预涂有 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1 特异性抗体。然后将标准品或样品添加到适当的微量滴定板孔中，并在每个微孔板中添加对 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1 特异的偶联多克隆抗体制剂和与辣根过氧化物酶 (HRP) 偶联的抗蛋白并孵化。然后将 TMB 底物溶液添加到每个孔中。只有那些含有 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1、偶联抗体和酶偶联抗蛋白的孔才会出现颜色变化。通过添加硫酸溶液终止酶-底物反应，并在 450 nm ± 2 nm 波长下用分光光度计测量颜色变化。然后通过将样品的 OD 与标准曲线进行比较来确定样品中的浓度。

材料和组件

试剂                                                                              数量

测定板 1

标准 2

样品稀释液 1 × 20ml

测定稀释剂 A 1 × 10ml

测定稀释剂 B 1 × 10ml

检测试剂A 1×120μl

检测试剂 B 1 × 120μl

洗涤缓冲液（25 x 浓缩液）1 × 30ml

底物 1 × 10ml

终止液 1 × 10ml

用于 96 孔的封板剂 5

说明 1

所需的其他用品

酶标仪

移液器和移液器吸头

EP管

去离子水或蒸馏水

试剂盒的储存

检测板、标准品、检测试剂 A 和检测试剂 B 收到后应保存在 -20℃。收到试剂盒后，底物应始终保存在 4℃。其他试剂按照小瓶上的标签保存。但要长期存放，请将整个试剂盒保持在-20℃。未使用的条带应保存在密封袋中，并提供干燥剂，以尽量减少暴露在潮湿空气中。试剂盒可在试剂盒的有效期内使用（自生产之日起六个月）。只要按照上述规定进行储存，打开的检测试剂盒将保持稳定直到所示的失效日期。

样品收集和储存

血清 - 使用血清分离管 (SST) 并让样品凝结 30 分钟，然后以大约 1000 × g 的速度离心 15 分钟。立即取出血清并进行检测或分装样品并在-20℃或-80℃保存。

血浆 - 使用 EDTA 或肝素作为抗凝剂收集血浆。收集样品 30 分钟内，在 2℃ - 8℃ 下以 1000 × g 离心 15 分钟。将样品储存在-20℃或-80℃。避免重复冻融循环。

尿液 - 无菌收集当天的第一次尿液（中游），直接排入无菌容器中。离心除去颗粒物，立即测定或等分并储存在≤-20℃。避免重复冻融循环。

组织匀浆-组织匀浆 的制备将因组织类型而异。对于该测定，组织用 1X PBS 冲洗以去除多余的血液，在 20 mL 的 1X PBS 中匀浆，并在 ≤ -20℃ 下储存过夜。 进行两次冻融循环以破坏细胞膜后，将匀浆离心 5分钟 5000 x g。立即取出上清液并进行测定或分装并储存在≤ -20℃。

细胞培养上清液和其他生物体液 - 通过离心去除微粒并立即测定或分装样品并在 -20℃ 或 -80℃ 下储存。避免重复冻融循环。

笔记：

5天内用完的样品可在2-8℃保存，否则样品必须在-20℃（1个月）或-80℃（2个月）保存，以免失去生物活性和污染。

由于某些化学物质的影响，使用化学裂解缓冲液制备的组织或细胞提取样品可能会导致意外的 ELISA 结果。

受细胞活力、细胞数量和采样时间等因素的影响，试剂盒可能无法检测到来自细胞培养上清液的样本

样品溶血会影响结果，因此溶血标本无法检测。

进行测定时，将样品缓慢带到室温。

不要使用经过热处理的样品。

程序的限制

AOBIOUS 只对试剂盒本身负责，不对检测过程中消耗的样品负责。用户应计算整个测试中可能使用的样本量。请提前预留足够的样品。

试剂盒不应超过试剂盒标签上的有效期。

不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合或替代。

如果样品产生的值高于最高标准，则用样品稀释剂进一步稀释样品并重复测定。标准稀释剂、操作员、移液技术、洗涤技术、孵育时间或温度以及试剂盒使用时间的任何变化都可能导致结合的变化。

试剂制备

洗涤缓冲液 - 如果浓缩液中形成晶体，温热至室温并轻轻混合直至晶体*溶解。将 30 mL 洗涤缓冲液浓缩液稀释到去离子水或蒸馏水中，制备 750 mL 洗涤缓冲液。

标准品 - 用 1.0 mL 样品稀释剂重新配制标准品。这种重构产生 200 ng/mL 的储备溶液。在进行连续稀释之前，让标准静置至少 15 分钟并轻轻搅拌（不允许直接在孔中进行连续稀释）。未稀释的标准品用作高标准品 (200 ng/mL)。样品稀释剂用作零标准 (0 ng/mL)。

ng/mL 200 100. 50.0 25.0 12.5 6.25 3.12 0

检测试剂 A 和 B - 分别使用检测稀释剂 A 和 B (1:100) 稀释至工作浓度。

测定程序

让所有试剂达到室温（请不要将试剂直接在37℃溶解）。所有试剂在移液前应通过轻轻旋转*混合。避免起泡。 为 1 次实验保留适当数量的条带，并从微量滴定板上移除多余的条带。取出的试纸条应重新密封并在 4℃ 下保存至试剂盒有效期。按照前几节的指示准备所有试剂、工作标准和样品。请在测定前预测浓度。如果这些值不在标准曲线的范围内，用户必须为其特定实验确定最佳样品稀释度。

每孔加入 100 μl 标准品、空白或样品。盖上板封口机。37℃孵育2小时。

除去每孔的液体，不要洗涤。向每个孔中加入 100 μl 检测试剂 A 工作溶液。盖上板封口机。37℃孵育1小时。检测试剂 工作溶液可能出现混浊。温热至室温并轻轻混合直至溶液均匀。

吸出每个孔并清洗，重复该过程 3 次，共清洗 3 次。通过使用喷瓶、多通道移液器、歧管分配器或自动清洗器向每个孔填充清洗缓冲液（约 400 μl）进行清洗。在每个步骤中*去除液体对于良好的性能至关重要。最后一次洗涤后，通过吸出或倾析去除任何剩余的洗涤缓冲液。将板倒置并用干净的纸巾吸干。

每孔加入 100 μl 检测试剂 B 工作溶液。盖上新的板封口机。37℃孵育1小时。

重复步骤 4 中的抽吸/洗涤。

向每个孔中加入 90 μl 底物溶液。盖上新的板封口机。37℃孵育15-30分钟。避光。

向每个孔中加入 50 μl 终止溶液。如果颜色变化不均匀，轻轻敲击板以确保充分混合。

使用设置为 450 nm 的微孔板读取器一次确定每个孔的光密度。

笔记：

吸光度是孵育时间的函数。因此，在开始检测之前，建议在使用前新鲜制备所有试剂，并将所有需要的条孔固定在微量滴定框架中。这将确保每个移液步骤的经过时间相等，不会中断。

请按照说明小心重新配制标准品或工作检测试剂 A 和 B，避免起泡并轻轻混合直至晶体*溶解。重新配制的标准检测试剂 A 和 B 只能使用一次。该测定需要小体积移液。为尽量减少移液引起的不精确，请确保已校准移液器。一次移液时，建议吸取 10μl 以上。

为了确保准确的结果，在孵育步骤中必须正确粘附封板剂。不要让孔在孵育步骤之间长时间未覆盖。一旦将试剂添加到孔条中，在检测过程中的任何时候都不要让条干燥。

对于程序中的每个步骤，将试剂添加到检测板的总分配时间不应超过 10 分钟。

为避免交叉污染，请在添加每个标准液、添加样品和添加试剂之间更换移液器吸头。此外，为每种试剂使用单独的容器。

洗涤程序至关重要。洗涤不充分会导致精度差和吸光度读数错误升高。

建议复制所有标准和样品，尽管不是必需的。

底物溶液很容易被污染。请避光。

特异性

该检测可识别重组和天然人 1-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1。没有观察到明显的交叉反应或干扰。

注：受限于现有技术和知识，我们不可能完成人类与所有类似物之间的交叉反应检测，因此交叉反应可能仍然存在。

检测 范围

3.12-200 纳克/毫升。

结果计算

平均每个标准、对照和样品的重复读数，并减去平均零标准光密度。通过使用能够生成四参数逻辑 (4-PL) 曲线拟合的计算机软件减少数据来创建标准曲线。作为替代方案，通过在 x 轴上绘制每个标准的平均吸光度与 y 轴上的浓度来构建标准曲线，并通过图表上的点绘制最佳拟合曲线。可以通过绘制 1-磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸磷酸二酯酶 γ-1 浓度的对数对 OD 的对数对数据进行线性化，并且可以通过回归分析确定最佳拟合线。建议使用一些相关的软件来做这个计算，比如曲线专家1.3。此过程将产生适当但不太精确的数据拟合。如果样品已被稀释，则从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释因子。

重要提示：

受限于现状和科学技术，我们无法对供应商提供的原材料进行全面的鉴定和分析。因此使用该套件可能存在一些定性和技术风险

最终的实验结果将与产品的有效性、终端用户的操作技能和实验环境密切相关。请确保有足够的样品可用。

不同批次的试剂盒在检测范围、灵敏度、显色时间等方面可能略有差异。请严格按照试剂盒说明书进行实验，本站电子版仅供参考。

第一次开板时，孔内可能会有一些雾状物质。它不会对最终的化验结果产生任何影响。

除非需要，否则不要从储存袋中取出微量滴定板。

具有 10nm 或更小带宽和 450nm 波长处 0-3 OD 或更大光密度范围的微量滴定板读数器可用于吸光度测量。

每次转移时使用新的一次性移液器吸头以避免污染。

不要将试剂从一个试剂盒批次替换到另一个试剂盒批次。仅使用制造商提供的试剂。

即使是同一个操作员，在两个单独的实验中也可能得到不同的结果。为了获得更好的重现性结果，应控制测定中每个步骤的操作。此外，建议在每批检测前进行初步实验。

每个试剂盒都经过严格的 QC 测试。但是，由于一些意外的运输条件或不同的实验室设备，最终用户的结果可能与我们的内部数据不一致。来自不同批次的试剂盒之间的测定内差异也可能来自上述因素。

来自不同制造商的相同产品的套件可能会产生不同的结果，因为我们没有将我们的产品与其他制造商进行比较。

有效期：六个月。

预防

建议用于该试剂盒的终止溶液是酸性溶液。使用此材料时，请佩戴眼部、手部、面部和衣物保护装置。

典型数据

此图表数据作为示例显示。每次运行测定时都必须生成标准曲线。

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